Реакция связывания комплемента, оценка иммунного статуса

Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:

1. Постановка и учет основного опыта реакции связывания комплемента (РСК).

Алгоритм постановки основного опыта реакции связывания комплемента

Реакция ставится в общем объеме 1,0 мл, каждый из ингредиентов добавляется в рабочей до­зе, содержащейся в 0,2 мл.

Берут шесть пробирок:

в первую пробирку вносят исследуемую сыворотку (пациента), антиген и комплемент (опытная пробирка),

во вторую – положительную сыворотку, антиген и комплемент (положительный контроль),

в третью - отрицательную сыворотку, антиген и комплемент (отрицательный контроль),

в четвертую - исследуемую сыворотку, комплемент и вместо антигена изотонический раствор натрия хло­рида (контроль сыворотки),

в пятую - антиген, комплемент и 0,85 % раствор натрия хлорида вместо сыворотки (контроль антигена),

в шестую – только 0,6 мл 0,85 % раствор натрия хлорида (контроль гемсистемы).

Одновременно гото­вят гемолитическую систему, смешивая равные объемы гемолитическую сыворотку в тройном титре и 3 % взвесь эритроцитов барана.

Про­бирки ставят в термостат при температуре 37 ⁰С на 1 ч.

Затем во все пробирки добавляют по 0.4 мл гемолитичес­кой системы (индикаторная система). После тщательного смешивания ингредиентов пробирки вновь ставят в термостат при 37 °С на 1 ч.

Результаты учитывают после извлечения из термостата и оконча­тельно - после 15 - 18 ч нахождения реакции в холодильнике.

При окончательном учете интенсивность реакции связывания комплемента учитывают по факту отсутствия реакции гемолиза, отмечает плюсами:

"++++" - резко положительная реакция с полной задержкой гемолиза, жидкость в пробирке бесцветная, все эритроциты осели на дно;

"+++", "++" - положительная реакция, отличается нарастанием окраски жидкости вследствие гемолиза уменьшения количества эритроцитов в осадке;

"+" - слабо положительная реакция, жидкость интенсивно окрашена, на дне пробирки незначительное количество эритроцитов.

Отрицательная реакция связывания комплемента обозначается знаком "–" при этом наблюдается полный гемолиз, жидкость в пробирке имеет интенсивно-розовую окраску («лаковая кровь»). Во всех контрольных пробирках, за исключением положительного контроля сыворотки и контроля гемсистемы при правильной постановке РСК должен наблюдаться гемолиз.

В настоящее время РСК ставят не в пробирках, а в специальных планшетах, внося в лунки планшета те же самые компоненты реакции и в той же самой последовательности, но объем компонентов РСК, вносимых в каждую из лунок значительно меньше (как минимум в 10 раз).

Занятие № 17