Определение титра и рабочей дозы комплемента

Комплемент – неспецифический термолабильный фактор – используется в ряде серологических реакций.

Титр комплемента – это минимальное количество, которое способно гемолизировать эритроциты в гемолитической системе.

Рабочая доза комплемента превышает титр на 20-25%, так как любой антиген может обладать антикомплементарными свойствами, к титру делают надбавку. Например, если титр 0,4мл, то рабочая доза должна быть 0,5мл.

Компоненты реакции:

1) антиген – 3% взвесь эритроцитов барана;

2) гемолитическая сыворотка, полученная при гипериммунизации кролика эритроцитами барана;

3) комплемент - свежая или лиофильно высушенная сыворотка крови морской свинки.

Смесь равных объемов взвеси эритроцитов барана и гемолитической сыворотки представляет собой гемолитическую систему, используемую во второй фазе РСК.

«+» реакция характеризуется наличием гемолиза;

«–» реакция характеризуется отсутствием гемолиза.

25. Постановка и учёт РГА (реакция гемааглютинации)

Реакция гемагглютинации- это один из методов индикации вирусов.

Ставится двумя методами:

1) капельным на стекле;

2) в пробирках – развернутая реакция.

Компоненты:

1) исследуемый материал: аллантоисная жидкость, суспензия хорионаллантоисной оболочки куриного эмбриона, экстракт из культуры клеток, зараженных вирусом;

2) 5% взвесь куриных эритроцитов;

3) физиологический раствор.

На чистое обезжиренное стекло наносят 1 каплю взвеси эритроцитов и 1 каплю исследуемого материала.

При «+» результате – хлопья агглютинации эритроцитов.

26. Определение чувствиетльности микробов к антибиотикам методом «бумажных дисков»

Биологическая активность антибиотиков выражается в международных единицах (МЕ). За единицу активности принимается то минимальное количество антибиотика, которое задерживает рост стандартного штамма, определенного вида микроорганизма в строго определенных условиях. Степень чувствительности к антибиотикам необходимом определять для успешного проведения лечения. Наиболее распространен метод «бумажных дисков»: в чашку Петри с МПА «газоном» засевают взвесь изучаемой культуры микроба. На засеянную поверхность агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками. Диски располагают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии от края чашки 15 мм. Чашки выдерживают в термостате 18-20 часов при температуре 37 ^оС. Учёт результатов проводят на 2-ой день путем измерения зон задержки роста. Диаметр зоны задержки роста:

Меньше 10 мм – штамм устойчивы й

11-15 мм – штамм малоустойчивый

15-25 мм - штамм чувствительный

больше 25мм – штамм высокочувствительный.