Лабораторно-практические работы.

3.1. Методика обнаружения кортикостерона и гидрокортизона в сыворотке крови.

Выходной контроль.

4.1. Тесты.

4.2. Ситуационные задачи.

5. Литература:

5.1. Материалы лекций.

5.2. Николаев А.Я. Биологическая химия.-М.: Высшая школа, 1989., С 358-398.

5.3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 1990.С.174-202.

5.4. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 2004. С. 255-288.

Лабораторно-практические работы.

Методика обнаружения кортикостерона и гидрокортизона в сыворотке крови.

Гормоны коры надпочечников можно обнаружить, используя их способность флуоресцировать в серной кислоте.

ХОД РАБОТЫ:

1. В микрохимическую пробирку вносят 10-15 капель сыворотки крови, добавляют равный объем петролейного эфира. Пробирку закрывают пробкой и встряхивают в течение 2 мин (удаление веществ, мешающих определению стероидов). Пробирку ставят в штатив и дают разделиться слоям сыворотки и эфира. Верхний слой (эфир) отсасывают и отбрасывают.

2. После удаления эфирного слоя в пробирку добавляют хлороформа до 1 мл и в течение 30 сек. встряхивают, при этом гормоны экстрагируются хлороформом. Полученный экстрат содержит как гормоны надпочечников, так и женские половые гормоны, которые необходимо удалить. Для удаления половых гормонов, к хлороформному экстрату добавляют 5-6 капель 0,4% едкого натра. Пробирку закрыть пробкой и перемешивают содержимое в течение 15 сек., после этого верхний слой (щелочь) быстро отсасывают. Удаление щелочи следует проводить быстро, т.к. кортикостероиды разрушаются в щелочной среде. К хлороформному экстрату добавляют 10-15 капель концентрированной серной кислоты, пробирку закрывают пробкой и встряхивают. Оставляют стоять 15-30 мин., затем голубую флюоресценцию выявляют при облучении пробы ультрафиолетовым светом.

Основные вопросы темы.