Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?


Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Методы серологической идентификации менингококков или их антигенов





1) Реакция агглютинация на стекле (см. Инструкцию по применению сывороток).

2) Реакция агглютинации в полистироловых пластинах

При постановке реакции агглютинации (РА) используют полистироловые пластины или большие стекла. Для каждой испытуемой культуры менингококков используют один ряд лунок пластины. Число горизонтальных лунок соответствует числу агглютинирующих группоспецифических сывороток. Жидкую сыворотку каждой серогруппы в лунке разводят вдвое (1 капля сыворотки плюс 1 капля взвеси культуры). В отдельной лунке каждого ряда готовят взвесь испытуемых культур. Для этого запаянной изогнутой пастеровской пипеткой бактериальную массу снимают с чашки Петри и тщательно эмульгируют в физиологическом растворе. Для получения оптимальной рабочей густоты к взвеси добавляют по 1,0 мл физиологического раствора. Взвесь разносят по 1 капле в горизонтальные лунки. Пластины встряхивают в течение 1 мин. руками или шуттеле-аппарате.

Учитывают реакцию в течение первых 3-х мин. Контролем служит лунка, в которой готовят исходную взвесь бактерий в физиологическом растворе.

3) Реакция преципитации для определения серогруппы менингококков и метод встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ) для определения специфического антигена в СМЖ (экспресс-диагностика). Используют только те коммерческие сыворотки, в «Наставлении» к которым сказано, что они пригодны для постановки реакции преципитации.

^ Приготовление агара:

Из дальневосточных сортов агар-агара готовят 2% взвесь на дистиллированной воде. В случае непрозрачного раствора агара, в него добавляют 10% раствор СаСI2; из расчета 50мл на 1л. раствора агара. Профильтрованный растопленный агар разливают в ванночки слоем в 1 см, в застывшем состоянии нарезают квадраты размером 1 х 1 см и завязывают в марлю. Сначала его промывают проточной водопроводной водой в течение 24-48 часов, затем сутки - дистиллированной, которую заменяют 3-4 раза. Отмытый агар отжимают от воды, помещают в колбу и разогревают на кипящей водяной бане, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и добавляют дистиллированную воду до первоначального объема, т.е. до концентрации, равной 2%. К горячему 2% агару добавляют равный объем «камерного» веронал-мединалового буфера, разведенного в 2 раза дистиллированной водой, и кипятят в водяной бане до полной гомогенизации смеси. К остывшему до 60° агару добавляют тимол или крезол из расчета 1:10000. Полученный 1% раствор агара на веронал-мединаловом буфере используют для постановки реакции ВИ-ЭФ. Для реакции микропреципитации используют 1% агар, приготовленный на физиологическом растворе.

4) Реакция микропреципитации для определения серогруппы менингококков.

В чашку Петри или стеклянную пластинку размером 9 х 12 см наливают 20 мл, а на предметное стекло - 5 мл расплавленного 1% агара на физиологическом растворе. В застывшем агаре с помощью металлических трубок просекают отверстия (лунки) диаметром 3 мм, из которых агаровые пробки удаляют путем отсоса этой же трубкой или острием иглы. Расстояние между центрами лунок 0,5 см.

Лунки в агаре располагают следующим образом: в центральную лунку пастеровской пипеткой наливают сыворотку, в периферические - прогретые при температуре 100°С в течение 15 минут взвеси испытуемых культур. Микробную кипяченую взвесь можно хранить в холодильнике в течение 2-х недель. Для реакции микропреципитации используют не разведенные сыворотки.

Концентрация испытуемой суточной культуры менингококка, выученной на 20% сывороточном агаре, должна составлять 30-60 единиц, быть в 3-6 раз гуще оптического стандарта мутности в 10 единиц. Чашки Петри или стеклянные пластины с лунками, заполненными сывороткой и антигенами, помещают во влажную камеру (эксикатор с водой) на 24 - 48 часов при температуре 20-22°С. По окончании срока учитывают реакцию. Реакция проявляется только со штаммами менингококков гомологичной серогруппы в виде линии преципитации.

Date: 2016-06-06; view: 394; Нарушение авторских прав; Помощь в написании работы --> СЮДА...



mydocx.ru - 2015-2024 year. (0.006 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию