Определение количественного и качественного состава микроорганизмов зерна

Исследования проводились на зерне овса, пшеницы, возделываемых в Павлодарской области, и на муке от ведущего производителя зерновых продуктов Павлодарской области.

Определение количественного и качественного состава микроорганизмов зерна пшеницы «Саратовская-29» и овса «Иртыш-22»

Рисунок А.1 – Исследуемое зерно

Рисунок А.2 – Приготовление питательной среды

Рисунок А.3 – Подготовка навесок зерна

Навеска (пшеницы, овса), массой 5 г помещалась в колбу с 50 мл стерильной водопроводной воды и 2–3 г песка. Колбу взбалтывали круговыми вращательными движениями 10 мин.

Рисунок А.4 – Приготовление вытяжки и разведений

Из полученной вытяжки готовятся разведения 1:100, 1:1000, 1:10000. (отдельными стерильными пипетками берут по 10 мл суспензии и переносят в колбы, содержащие по 90 мл стерильной водопроводной воды). Затем из каждого разведения делают глубинный посев на МПА в двух повторностях. Чашки инкубируют при 30 °С.

Рисунок А.5 – Посев из каждого разведения на МПА

Рисунок А.6 – Готовые образцы посевов из разведений навесок овса и пшеницы

Через 5 дней инкубации подсчитывают общее число колоний, выросших на МПА в чашках, и рассчитывают количество микроорганизмов на 1 г зерна. Колонии, как правило, подсчитывают с помощью лупы, не открывая чашек Петри. Чтобы определить степень обсемененности изучаемого объекта (микробное число) необходимо результат подсчета количества колоний в чашках Петри, помножить на знаменатель соответствующего разведения и вычислить среднее арифметическое число из полученных цифр.

При анализе посева на МПА, разведений из вытяжки зерна пшеницы «Саратовская-29», было подсчитано следующее число колоний в чашках Петри: образец 1 – 900, образец 2 – 780, образец 3 – 400. Полученные цифры умножаем на знаменатель соответствующего разведения:

Образец 1 – 900 × 100 = 90000;

Образец 2 – 780 × 1000 = 780000;

Образец 3 – 400 × 10000 = 4000000.

Из полученных цифр вычисляем среднее арифметическое:

(90000 + 780000 + 4000000): 3 = 1623333.

Следовательно, во взятой навеске исследуемого продукта содержится 1623333 микробных клеток. По полученным результатам рассчитываем количество микробных клеток в 1 г исследуемого продукта. Так как масса исследуемой навески составляет 5 г, полученный результат делим на число 5:

1623333: 5 = 324667.

Итого – в 1 г исследуемой навески зерна пшеницы «Саратовская-29» содержится 324667 микробных клеток.

При анализе посева на МПА, разведений из вытяжки зерна овса «Иртыш-22», было подсчитано следующее число колоний в чашках Петри: образец 1 – 205, образец 2 – 150, образец 3 – 60. Полученные цифры умножаем на знаменатель соответствующего разведения:

Образец 1 – 205 × 100 = 20500;

Образец 2 – 150 × 1000 = 150000;

Образец 3 – 60 × 10000 = 600000.

Из полученных цифр вычисляем среднее арифметическое:

(20500 + 150000 + 600000): 3 = 256834.

Следовательно, во взятой навеске исследуемого продукта содержится 256834 микробных клеток. По полученным результатам рассчитываем количество микробных клеток в 1 г исследуемого продукта. Так как масса исследуемой навески составляет 5 г, полученный результат делим на число 5:

256834: 5 = 51367.

Итого – в 1 г исследуемой навески зерна овса «Иртыш-22» содержится 51367 микробных клеток.

Определяя качественный состав микроорганизмов зерна, выросшие на МПА колонии, группируют по культуральным признакам. Из каждой группы колоний готовят препараты, выявляют принадлежность микроорганизмов к роду или семейству и определяют численность микробов каждой группы в процентах от общего количества микроорганизмов.

Рисунок А.7 – Взятие материала образцов и приготовление препаратов

Рисунок А.8 – Готовые препараты для микроскопирования

Рисунок А.9 – Микроскопирование готовых препаратов

Было выявлено, что на поверхности семян обитают бактерии, микроскопические грибы, актиномицеты и дрожжевые организмы.

Типичными эпифитами, которые постоянно присутствуют на поверхности зеленых растений, откуда попадают на зерно, являются бактерии рода Erwinia.

Erwinia herbicola (травяная палочка) представляет собой мелкую (1–3 × 0,7 мкм) подвижную палочку, имеющую 1–2 полярных жгутика (грамотрицательная, бесспоровая, факультативный анаэроб). На мясопептонном агаре образует гладкие колонии, имеющие вначале сероватый оттенок, изменяющийся постепенно до золотисто-желтого.

Содержание Erwinia herbicola на зерне пшеницы «Саратовская-29» составило 80 % от общего числа выявленных микроорганизмов, а на зерне овса «Иртыш-22» – 90 %. Преобладающее количество данного вида бактерий служит в определенной степени показателем свежести и доброкачественности зерна.

Микрококки (лат. Micrococcus) – род маленьких грамположительных сферических бактерий семейства Micrococcaceae, которые располагаются поодиночке или в неправильных скоплениях. На плотных питательных средахобразуют круглые, гладкие колонии белого, жёлтого или красного цвета. Micrococcus – облигатные аэробы, сапрофиты или факультативные паразиты, патогенных видов нет. Все хорошо растут на питательном агаре. Деление клетки происходит в любом направлении. Как правило, микрококки неподвижны и не образуют эндоспор.

Род Bacillus объединяет подвижные палочковидные клетки, размеры которых колеблются в довольно широких пределах. Жгутики расположены перитрихиально. Окрашивание по Граму различно: положительно или положительно только в молодой культуре. Облигатные или факультативные аэробы.