Реакция пассивной гемагглютинации

Для определения антител к ДНК чаще используют реакцию пассивной гемагглютинации. С этой целью антиген (ДНК) вначале осаждают на эритроцитах барана, а затем добавляют к ним исследуемую сыворотку. Если в сыворотке содержатся антитела к ДНК, происходит агглютинация эритроцитов и их гемолиз. В зависимости от типа используемого антигена удается выделить несколько типов антител к ДНК: I тип — антитела к односпиральной ДНК, II тип — к термоденатурированной ДНК, III тип — к нативной двуспиральной ДНК. Определение типа антител позволяет проводить дифференциальную диагностику различных заболеваний (см. ниже).

Неполные антитела к эритроцитам обнаруживаются при помощи прямого и непрямого тестов Кумбса. Непрямая проба Кумбса основана на выявлении агглютинации эритроцитов, нагруженных неполными антителами, которая появляется при добавлении антиглобулиновой сыворотки.

Проба осуществляется в два этапа. Вначале проводится сенсибилизация стандартных резус-положительных эритроцитов донора 0 (I) группы. Каплю взвеси эритроцитов вносят в пробирку, наслаивают на них несколько капель исследуемой сыворотки, в которой предполагают наличие антител к эритроцитам, и инкубируют 40 мин при 37 °C. Эритроциты осторожно отмывают от сыворотки физиологическим раствором. Неполные антитела, если они присутствуют в исследуемой сыворотке, фиксируются на эритроцитах, но не могут вызвать их агглютинацию (рис. 8).

Рис. 8. Схема проведения непрямой пробы Кумбса:

а, б — соответственно первый и второй этапы исследования

На втором этапе пробы на сухую тарелку наносят каплю стандартной антиглобулиновой сыворотки, содержащей антитела к человеческим иммуноглобулинам, и добавляют туда эритроциты, на которых предположительно фиксированы неполные антитела исследуемой сыворотки. Если на предыдущем этапе исследования на поверхности эритроцитов действительно фиксировались противоэритроцитарные антитела, последние взаимодействуют с антителами к иммуноглобулину стандартной антисыворотки (см. рис. 8). В результате происходит агглютинация (склеивание) эритроцитов.

При прямой реакции Кумбса используют собственные эритроциты пациента, которые предположительно уже были сенсибилизированы аутоантителами. Эритроциты добавляют в антиглобулиновую сыворотку: при наличии на их поверхности фиксированных иммуноглобулинов (антител к эритроцитам) возникает агглютинация эритроцитов.

Аутоантитела к эритроцитам обнаруживают при аутоиммунных гемолитических анемиях, гемолитической болезни новорожденных, системных заболеваниях соединительной ткани, хроническом активном гепатите и других заболеваниях.

Реакция преципитации

В основе механизма этой реакции лежит выпадение из раствора нерастворимого комплекса антиген-антитело. Реакция преципитации позволяет обнаруживать ничтожные количества белкового антигена (до разведения 1:1 000 000). Она в этом отношении чувствительнее многих химических реакций, хотя в свою очередь уступает по чувствительности реакции связывания комплемента и анафилаксии. Реакция преципитации нашла широкое применение для определения степени родства видов животных и растений.

Реакция преципитации основана на взаимодействии антигенов и антител в эквивалентных количествах. Кольцепреципитация — появление непрозрачного кольца преципитата при постепенном наслаивании растворимого антигена на иммунную сыворотку. Например, для определения антигенов сибирской язвы используют сыворотку крови иммунизированных лошадей, при этом кольцо преципитата появляется в течение 2 мин. Также эту реакцию можно проводить на твердых средах (агаре). При этом в два углубления среды помещаются сыворотка и взвесь бактерий, зона преципитации образуется между ними. Эти реакции используются для определения антигенов бактерий, тканей человека и животных, диагностики некоторых инфекционных заболеваний, определения видовой принадлежности белка в судебной медицине.

Феномен преципитации заключается во взаимодействии мелкодисперсных антигенов (преципитиногенов) с соответствующими антителами (преципитинами) и образованием преципитата (рис. 9). Постановку РП осуществляют двумя методами: в жидкой среде — по типу реакции флокуляции, кольцепреципитации или в плотной среде в агаре (геле). РП применяют в двух целях: выявление антигенов по известной иммунной преципитирующей сыворотке или антител с использованием известных антигенов. Существует много вариантов постановок реакции, но чаще всего используют следующие методики: реакция преципитации в геле по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия по Манчини, реакция иммуноэлектрофореза, реакция флокуляции, кольцепреципитации.

Рис. 9. Реакция преципитации:

1 — антиген; 2 — антитело