Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (Цоликлон анти-D Супер)

На тарелку наносят большую каплю реагента (около 0,1 мл). Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек. (резус положительная, нет агглютинации – резус отрицательная). Результаты реакции учитывают через 3 мин.

Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.

56. Выполнение пробы на:

- индивидуальную совместимость крови донора и больного.

- пригодность крови: кровезаменителей, других растворов при переливании.

Проба на индивидуальную совместимость

Для пробы на индивидуальную совместимость используют сыворотку (не плазму!) крови реципиента и консервированную кровь (эритроциты, лейкоциты) донора.

Сыворотка больного должна быть свежей, полученной в тот же день или накануне. Для получения сыворотки у больного берут 4-5 мл крови из вены в чистую пробирку без стабилизатора. После свертывания крови от сгустка отделяется сыворотка, которая служит для проведения проб на совместимость.

Первая проба на совместимость по группе системы АВО производится при комнатной температуре. На тарелку наносят 2 капли сыворотки крови больного, туда же добавляют маленькую каплю донорской крови в соотношении 1:10 и перемешивают покачиванием или стеклянной палочкой. При отсутствии агглютинации через 5 минут (не более!) надо считать, что кровь совместима. Если появляется агглютинация, то кровь донора несовместима с кровью больного и не должна быть ему перелита.

После проведения первой пробы необходимо провести пробу на совместимость по Rh-фактору. Для этого существует 2 доступных метода - реакция в сывороточной среде и в желатине.

Первый метод: на чашку Петри наносят 1-2 капли сыворотки больного и маленькую каплю донорской крови, после чего ее на 10 минут ставят в водяную баню (+46~+48 'С). Наличие агглютинации свидетельствует о несовместимости.

Второй метод: на дно пробирки помещают маленькую каплю донорской крови, добавляют 2 капли подогретого 10 % раствора желатина и 2 капли сыворотки крови больного. Через 10 минут инкубирования в водяной бане при. температуре +46-+48 'С в пробирку добавляют 5 мл подогретого изотонического раствора хлорида натрия. 'Наличие агглютинации свидетельствует о несовместимости крови донора и реципиента.

Следует отметить, что изоиммунные антитела и антитела других систем выявляются теми же методами, что и антитела анти-Rh, а некоторые - как антитела системы АВО. Поэтому несовместимость крови донора по этим антителам может быть выявлена при выполнении указанных проб на совместимость.

Биологическая проба является завершающей пробой на совместимость. С нее начинается переливание.

Струйно переливают 10-15 мл крови (эритроцитной массы, взвеси, плазмы), затем в течение 3 минут наблюдают за состоянием больного. При отсутствии явлений несовместимости (одышка, гиперемия лица, боли в животе, пояснице, беспокойство) вводят вновь 10-15 мл и опять наблюдают в течение 3 минут. Такую процедуру повторяют трижды. При отсутствии реакции продолжают вливание. В случае несовместимости, помимо описанных выше жалоб больного, становится малым и частым пульс, учащается и делается поверхностным дыхание, кожа лица приобретает сначала цианотично-красную окраску, затем бледнеет. В таких случаях, не дожидаясь развития гемотрансфузионного шока, необходимо на время прекратить переливание крови.

При переливании крови больному под наркозом при оценке биологической пробы должны учитываться объективные показатели (частота и наполнение пульса, артериальное давление, окраска кожного покрова, гемолиз, окраска мочи).

Оценка годности консервированной крови и ее компонентов для переливания. Перед трансфузией определяют пригодность крови для переливания: учитывают целостность упаковки, срок годности, нарушение режима хранения крови (возможное замерзание, перегревание). Наиболее целесообразно переливать кровь со сроком хранения не более 5-7 сут, так как с удлинением срока хранения в крови происходят биохимические и морфологические изменения, которые снижают ее положительные свойства. При макроскопической оценке кровь должна иметь три слоя. На дне расположен красный слой эритроцитов, он покрыт тонким серым слоем лейкоцитов и сверху определяется прозрачная слегка желтоватая плазма. Признаками непригодности крови являются: красное или розовое окрашивание плазмы (гемолиз), появление в плазме хлопьев, помутнения, наличие пленки на поверхности плазмы (признаки инфицирования крови), наличие сгустков (свертывание крови). При срочном переливании неотстоявшейся крови часть ее отливают в пробирку и центрифугируют. Розовое окрашивание плазмы указывает на гемолиз. При переливании замороженных компонентов крови упаковки с кровью быстро подогревают до температуры 38 0С, затем эритроциты отмывают от использованного криокорректора-глицерина для эритроцитов и диметилсульфоксида для лейкоцитов и тромбоцитов.

57. Оценка коагулограммы: время свертывания, длительность кровотечения, толерантного к гепарину, протромбиновый индекс, протромбиновое время, время рекальцификации.

Коагулограмма (гемостазиограмма) - это исследование, проводимое с целью определения свертывающей способности крови и возможных отклонений в ее работе.

При составлении коагулограммы учитывают следующие показатели:

1) время остановки кровотечения;

2) протромбиновое время;

3) тромбиновое время;

4) D-димер;

5) волчаночный антикоагулянт;

6) фибриноген;

7) антитромбин III;

8) активированное частичное тромбопластиновое время.

Скорость свертывания крови определяют посредством обычного прокола кожи, после которого засекают время до полной остановки кровотечения. Нормальным показателем считается показатель 2-3 мин. Увеличение времени может свидетельствовать о недостатке тромбоцитов и (или) нарушении их функций, что в свою очередь нередко свидетельствует о заболеваниях крови, почек или печени.

Протромбиновое время показывает, с какой скоростью фермент протромбин переходит в свою активную форму (тромбин). Тромбин способствует образованию кровяного сгустка, который закрывает дефект сосуда и останавливает, таким образом, кровотечение. Увеличение протромбинового времени в сравнении с нормой может свидетельствовать о гиповитаминозе К, а также дефиците факторов свертывания крови (не исключены заболевания печени).

Тромбиновое время отражает скорость перехода фибриногена (растворимого белка крови) в нерастворимый фибрин под влиянием тромбина. Фибрин выпадает в осадок в виде нитей, участвуя таким образом в конечной стадии образования кровяного сгустка. Увеличение данного времени может говорить о дефиците фибриногена, наличия в крови лекарственных препаратов: ингибиторов тромбина и фибриногена, а также гепарина.

Наличие в крови повышенного содержания фибриногена может говорить о воспалительных процессах в организме или возможном приеме женских половых гормонов. Аналогичная ситуация наблюдается у женщин в период беременности. Снижение уровня фибриногена в крови указывает на какие-либо нарушения в процессах его синтеза, а также внутрисосудистом свертывании крови.

D-димер представляет собой продукт распада фибрина и в норме должен присутствовать в крови, что говорит о стабильном образовании и разрушении фибрина. Это наблюдается также при синдроме диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови.

Сам факт присутствия в крови волчаночного фактора, а тем более его повышенного содержания является достаточно неблагоприятным, поскольку может стать причиной развития тромбозов.

Антитромбин III - это ингибитор тромбина, соответственно, его пониженное содержание в крови может стать причиной кровотечений и кровоизлияний.

Показатель активированного частичного тромбопластинового времени необходим для контроля гепаринотерапии у обследуемого и в норме составляет 30-40 с. Увеличение данного промежутка может говорить о недостатке или нарушений факторов свертывания крови, а также развитии гемофилии.

При необходимости проводят дополнительные исследования свертываемости крови.

Протромбиновый индекс отражает соотношение показателей протромбинового времени пациента к нормальному показателю протромбинового времени, выраженное в процентах.

На основании этого можно судить о содержании протромбина в организме. Повышение его уровня может также быть признаком таких заболеваний, как инфаркт миокарда или предынфарктное состояние, тромбоэмболия или злокачественные опухоли. Понижение уровня дает основание предположить его врожденный или приобретенный дефицит, а также гиповитаминоз К.

Время рекальцификации плазмы - это время, которое необходимо для образования сгустка фибрина и отражает процесс свертывания крови в целом. Изменение этого показателя отмечают при тех же заболеваниях, при которых отмечают изменения времени свертывания крови.

Тромботест дает возможность визуально определить содержание фибриногена в крови, поскольку при добавлении к плазме крови хлорида кальция в ходе исследования образуется фибриновый сгусток. Если концентрация фибриногена нормальная, то сгусток займет весь объем пробирки.

Изменения содержания фибриногена в крови имеют относительное диагностическое значение. Уменьшение этого показателя отмечается на фоне тяжелых поражений печени, гемолитической анемии и метастазировании злокачественных опухолей в костный мозг. Также пониженный уровень фибриногена наблюдается при тяжелых формах гепаторенального синдрома. Повышение содержания фибриногена в крови возможно при лейкозах, нефрозах, висцеральном сифилисе, непроходимости двенадцатиперстной кишки, гриппе, крупозной пневмонии, генерализации туберкулеза, а также при онкологических заболеваниях.

В норме у человека в крови существует некое динамическое равновесие между образованием фибрина и его растворением. Уменьшение фибринолитической активности говорит о повышенной тенденции к тромбообразованию или наличии некоторых ревматических заболеваний (степень снижения фибринолитической активности находится в прямой зависимости от активности ревматического процесса). Повышение фибринолитической активности крови может быть признаком повышенной опасности возникновения кровотечений..

Некоторое повышение этого показателя отмечается также после ранений или значительных хирургических вмешательств, что рассматривается как защитнокомпенсаторная реакция организма. Достаточно продолжительное угнетение процесса фибринолиза может стать причиной возникновения долго незаживающих ран и трофических язв.

Толерантность плазмы к гепарину зависит от времени рекальцификации плазмы после добавления к ней некоторого количества гепарина. Снижение этого показателя может свидетельствовать о дефиците V, VIII, X, XI, XII факторов свертывания и отмечается на фоне таких серьезных заболеваний печени, как цирроз и гепатит.

Повышение толерантности плазмы к гепарину свидетельствует о сердечной недостаточности, злокачественных опухолях, а также предтромботических состояниях. Аналогичная ситуация может отмечаться у женщин в последние месяцы беременности.

Время свертывания крови по Ли-Уайту определяет скорость образования сгустка в венозной крови. Как правило, данный метод применяют для экспресс-диагностики наиболее тяжелых нарушений свертываемости крови. Увеличение нормального временного промежутка между забором крови и образованием сгустка может быть физиологическим (при беременности) и патологическим (на фоне тромбоцитопатий, постгеморрагических анемий, болезни Виллебранда, при отравлении ядами, вызывающими удушье, а также при долгом применении некоторых лекарственных средств). Уменьшение времени свертывания крови по Ли-Уайту свидетельствует о гемофилии или апластической анемии.

Продолжительность кровотечения по Дуке отражает степень эластичности кровеносных сосудов и их способность к сокращению при повреждении, а также возможные патологии тромбоцитарной системы. Увеличение времени позволяет заподозрить такие заболевания, как тромбопеническая и атромбопеническая пурпуры, лейкоз, геморрагический диатез, цирроз печени, сопровождающийся увеличением селезенки, пороки развития кровеносных сосудов, нарушение сократительной способности капилляров. Также время кровотечения увеличивается на фоне отравления фосфором и длительном приеме некоторых лекарственных препаратов. Уменьшение данного времени может говорить либо о повышенной спастической способности капилляров, либо о технической ошибке в ходе проведения теста.

Ретракция кровяного сгустка отражает физикохимические свойства крови, которые, в свою очередь, зависят от числа и качества содержащихся в ней тромбоцитов и концентрации солей. Этот показатель имеет диагностическое значение при выявлении геморрагических диатезов, но только в совокупности с другими симптомами данного заболевания.

Нормальные показатели:

1) протромбиновый индекс - более 80 %;

2) время рекальцификации плазмы - 60-120 с;

3) тромботест - IV-V степень;

4) фибриноген - 5,9-11,7 мкмоль/л;

5) фибриноген В - не определяется;

6) фибринолитическая активность - 183-263 мин.;

7) толерантность плазмы к гепарину - 3-6 (7-11) мин.;

8) время свертывания крови по Ли-Уайту - 5-10 мин.;

9) продолжительность кровотечения по Дьюку (Дуке) - до 4 мин.;

10) ретракция кровяного сгустка - 44-65 %.

58. Оценка результатов инструментальных методов исследования: УЗИ, гистероскопического, рентгенологического, лапароскопического.

См. вопросы 44 (УЗИ), 72 (гистероскопия), 69 (гистерография).