Лабораторная диагностика аденовирусной инфекции крупного рогатого скота

Аденовирусная инфекция КРС (АВИ КРС, аденовирусная пневмония телят, аденовирус­ный пневмоэнтерит) у телят протекает остро и характеризуется поражением органов дыха­ния, пищеварения и конъюнктивитами. КРС часто является носителем латентных аденови­русов (АВ) КРС, вызывающих бессимптомные инфекции, патогенез и роль которых в общей патологии животных остается неясной. АВИ КРС регистрируется во многих странах мира.

Поставить диагноз на АВ по эпизоотологическим данным, клиническим и патологоанатомическим признакам нельзя, так как сходную патологию могут вызывать вирусы других таксономических групп: парагриппа-3, диареи, неориккетсии и др. Поэтому при постановке диагноза решающее значение имеют лабораторные исследования.

Лабораторная диагностика АВИ КРС заключается в следующем: обнаружение АГ в па­тологическом материале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных, в ИФ и РСК; выделение возбудителя в культуре клеток ТБ, ПЭК или ЛЭК и его групповая идентификация в серологических реакциях: (РСК, РДП и РИФ); выявление АТ в сыворотке крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в серологических реакциях: (РСК, РИГА, РДП и ЕLISА).

Лабораторную диагностику АВИ проводят с использованием соответствующего набора диагностикумов, выпускаемого биологической промышленностью, и параллельно с исследо­ванием материала на ПГ-3,
РС-инфекцию, ИРТ и ВД-БС. Показана возможность тести­рования АВИ с помощью ДНК-зонда. Это, по существу, экспресс-метод лабораторной диагностики АВИ, который можно с успехом применять при массовом обследовании телят в хо­зяйствах промышленного типа. Наиболее четкую картину гибридизации наблюдали на 5-7-е сут в пробах смывов из носа. Это соответствует динамике накопления вируса в организме зараженных животных.

Серологическая идентификация. Идентификацию выделенных

шт. вируса проводят в ИФ, РСК и РДП. Ввиду того, что КС и преципитирующий АГ вирусов 1-й подгруппы (1, 2 и 3) отличны от АГ
2-й подгруппы (4, 5, 6 и др.), РИФ, РСК и РДП ставят с 2-мя антисыво­ротками, соответствующим 2 подгруппам. Препараты считаются положительными при на­личии флюоресценции в 10% клеток, заражённых патологическим материалом, при ее от­сутствии в контрольной (незараженной) культуре клеток. Срок выявления АВ в культуре клеток зависит от заражающей дозы и колеблется в пределах 20-96 ч. Показана возмож­ность применения сыворотки к гексону 1-го типа АВ человека для обнаружения АВ КРС. Близкое АГ родство АВ 1-й подгруппы КРС и человека может служить основанием для соз­дания на основе гексона единого диагностикума для ИФ-выявления данных АВ.

Исследование в данном методе антигексоновых сывороток к АВ позволяет повысить его эффективность в 3 раза в сравнении с использованием антисыворотки к цельному вирусу.

НИФ. Для экспресс-диагностики АВИ КРС в клинических образцах разработан вариант непрямой ИФ клеточных культур на покровных стеклах, зараженных АВ, с помощью монАТ с групповой специфичностью гексонов всех АВ млекопитающих.

РСК. С ее помощью можно успешно обнаруживать и идентифицировать выделенные полевые шт. АВ. РСК ставят по общепринятой методике в макро- или микровариантах. В качестве испытуемого АГ используют органы и ткани больных животных, а также культуральный вирус, полученный после заражения культуры клеток. Разработаны методики при­готовления АГ и схемы иммунизации для получения (1:1280) сывороток.

РДП.Ставят в чашках Петри в слое застывшего агара. Как и РСК, её используют для идентификации вновь выделенных шт. АВ с гипериммунными сыворотками кроликов (сыворотки морских свинок для этой цели не применяют). Шт. серотипов 1-й подгруппы (Воvine 10, Воvine -19, WBR 1) в РДП прекрасно реагируют между собой, тогда как шт. 2-ой подгруппы (ТНТ/62, В4/65 и 671/130) проявляют низкую активность в РДП даже с гомоло­гичными сыворотками. Однако, если использовать концентрированные АГ этих шт., с по­мощью РДП удается четко выявить перекрестную АГ- связь между ними. В качестве ис­пытуемого АГ используют культуральную вируссодержащую жидкость, которую необходи­мо концентрировать.

РТНГА. Рекомендуют для идентификации выделенного в культуре клеток вируса. При положительных реакциях РСК и РДП устанавливают принадлежность АВ к 1-й или 2-й под­группе АВ КРС и проводят его типирование с типоспецифическими сыворотками к АВ КРС. Типирование бычьих АВ осуществляют в научно-исследовательских учреждениях, имею­щих типоспецифические сыворотки и вирусы для РН.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Необходимо иметь в виду, что при положительном результате выделения и идентификации АВИ для окончательной поста­новки диагноза необходимо исследовать парные сыворотки больного животного с выделен­ным вирусом. Если при помощи РИГА и РСК выявлено 4-кратное и более повышение титра АТ к выделенному вирусу во 2-й сыворотке больного по сравнению с 1-й, ставят диагноз. В реакциях используют парные пробы сывороток, взятые в первые 2-3 сут болезни и через 14-30 дн. У заболевших животных вначале выявляются АТ в РИГА, затем - в РН и РТГА и уже через 1-1,5 нед - в РДП и РСК. КС и ПА сохраняются у животных-реконвалесцентов до 4 мес. У экспериментально заражённых телят ВНА обнаруживают на 5-й дн после заражения в титре 2,2 log₂ и на 10-й дн - в титре 4-4,3 log₂.

ЕLISА. Установлена в 100 раз большая его чувствительность для выявления АТ к гек-соновому АГ АВ по сравнению с РСК Были получены гипериммунные, высокоактивные и специфические сыворотки против гексонов АВ 1-й подгруппы (ВАV1 и ВАV3) и 2-й под­группы (ВАV7), которые были рекомендованы при разработке иммуноферментного набора для серодиагностики АВИ КРС. Для диагностики АВИ биопромышленность выпускает 2 диагностических набора для выявления и идентификации вируса и АТ методами ИФ, РСК, РДП и РНГА.

Дифференциальная диагностика. Клинико-эпизоотологическая диагностика АВИ за­труднена из-за сходства её с ПГ-3, ВД-БС, ИРТ,
РС-инфекцией, хламидиозом и другими бо­лезнями, поражающими респираторно-кишечный тракт животных. Кроме того АВИ часто протекает в ассоциации с вышеуказанными болезнями. Поэтому только лабораторные ис­следования, проводимые с использованием диагностических наборов к указанным болезням, помогут правильно поставить диагноз.