Лабораторная диагностика чумы крупного рогатого скота и мелких жвачных

Чума КРС - острая заразная вирусная болезнь, характеризующаяся высокой лихорадкой, катарально-геморрагическим, крупозно-дифтерическим воспалением слизистых оболочек. Распространена в Индии, странах Ближнего Востока, Египте и в 22 странах Центральной Африки. Вспышки болезни происходят в результате разноса её дикими буйволами и анти­лопами куду.

Инфекция в бывшем СССР не регистрировалась с 1928 г., в 1991 г. на границе с Монголией была зарегистрирована вспышка чумы среди яков в Тувинской республике. Сотрудники ВНИИВВиМ поставили лабораторный диагноз и ликвидировали эпизоотию с помощью вакцины.

Чума мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) - заболевание овец и коз, характеризующее­ся лихорадкой, диареей, язвенными поражениями слизистой оболочке ротовой полости, пневмонией. Характерные клинические признаки: тифоподобное состояние, некротиче­ский стоматит, поражение слизистых оболочек носа и глаз, профузная диарея, а в терми­нальных стадиях - вторичная бактериальная пневмония.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных, результатов лабораторных исследований и биопробы на восприимчивых животных. Лабораторная диагностика предусматривает: выделение вируса в культуре клеток и иденти­фикация его в РН, обнаружение вирусного АГ в органах и тканях от павших и вынужденно убитых животных в РСК, РДП, ВИЭОФ, РТНГА, РИГА, РИФ, ИФА; обнаружение специ­фических АТ у переболевших животных в РСК, РН, РДП, РТГА, ИФА. Разработан экс­пресс- метод диагностики болезни и видовой дифференциации морбилливирусов. Для этого используется ПЦР небольшого участка (430 п.н.) Р-гена с 389 по 821 н. в связи с тем, что нуклеотидная последовательность его 5^х- и 3- концов является достаточно консервативной, что позволяет унифицировать праймеры для всех морбилливирусов. С другой стороны, уча­сток, ограниченный этими праймерами, имеет достаточную степень вариабельности, что по­зволяет дифференцировать видовую принадлежность вируса. Нуклеотидная гомология амплифицированного участка Р-гена в парах ВЧ КРС - ВЧ МЖЖ, ВЧ КРС - ВЧС, ВЧ МЖЖ - ВЧС для исследованных штаммов составляет соответственно 66,67, 60,84 и 59,21%. Нуклео­тидная гомология этого участка гена Р у вируса, выделенного от норок,с ВЧ КРС, ВЧП и ВЧ МЖЖ составила 60,84, 98,6 и 59,21% соответственно.

Выделение вируса. Материал для выделения вируса берут от больных (кровь, пунктат лимфоузлов) или убитых и павших животных (предлопаточные, мезентериальные лимфоузлы, селезенка). Патматериал берут в стерильную, плотно закрывающуюся посуду и доставляют в лабораторию нарочным в опечатанном термосе со льдом при строгом соблюдении мер предосторожности. Гепаринизированную кровь в стерильных условиях разливают по пробиркам и центрифугируют при 2500 мин-¹ 15-20 мин. Образовавшийся слой лейкоцитов между эритроцитами и плазмой в форме суспензии или пленки переносят пастеровской пипеткой в стерильный флакон. Пленку лейкоцитов отмывают от эритроцитов питательной средой и измельчают. Суспензию лейкоцитов в питательной среде используют для заражения культуры клеток. Заражать последнюю можно и цельной кровью. Вирус от больных животных можно выделить прижизненно из пунктата предлопаточных лимфоузлов в инкубационный период за сутки до начала лихорадки, а затем на всем протя­жении болезни.

Лимфоузлы и селезенку можно хранить при -20°С в течение 60 дн, при -40°С - 6 мес, при 2-4°С - не более 7 дн. В кусочках размером 1-2 см, помещенных в 10%-ный NаС1, вирус сохраняется при 2°С 15-30 дн. Вируссодержащая нитратная кровь в условиях комнатной температуры сохраняет активность 4-6 дн, при 5°С - 1 нед, при 0°С - 3-4 нед. В лиофильно высушенном материале, находящемся в ампулах под вакуумом при -20°С, вирус выживает более 5 лет, а при 2-4° С - не менее 1 года. При лиофилизации в качестве стабилизатора в суспензию добавляют 2% глюкозы и 5% пептона.

Заражение культуры клеток. Используют культуру клеток почки телят, которую после удаления ростовой среды заражают, нанося на слой клеток суспензию лейкоцитов исследуе­мого животного или суспензию его органов. Для адсорбции вируса культуры выдерживают 2 ч при 37° С, после чего инокулят отсасывают и вносят питательную среду с 2,5% телячьей инактивированной сыворотки. За культурой наблюдают 9-18 дн. На положительный резуль­тат указывает ЦПЭ. При отсутствии ЦПЭ делают слепой пассаж. Обычно при изоляции ви­руса таким методом затрачивается 20-25 дн. Идентификацию проводят в РН.

Заражение восприимчивых животных. Рекомендуют заражать молодняк КРС или те­лят буйволов кровью или 10-20%-ной суспензией лимфоузлов, полученной от больных жи­вотных в первые 5 дн после заболевания. Животным вводят подкожно 10 мл исследуемого материала. Это неразбавленная кровь или 10-20%-ная суспензия селезенки и лимфоузлов. На положительный результат указывает подъем температуры тела через
5 дн после зараже­ния и последующее развитие типичной картины болезни. Смертность очень высокая - около 90%. В случае выздоровления животных дополнительным критерием специфичности тече­ния болезни является рост уровня АТ.