Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?


Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Серодиагностика и ретроспективная диагностика





Ретроспективная диагностика с целью определения типа и варианта ВЯ, вызвавшего в прошлом заболевание животных, основана на идентификации AT в РПСК, РДП и РРИД, НРИФ, реакции серозащиты на мышатах и РН в культуре клеток.

Для достоверного выявления AT и определения их типовой специфичности пробы сыво­ротки крови должны быть взяты не ранее 7 дн с момента появления у животных признаков везикулярного заболевания или проведения вакцинации. На исследование следует направ­лять 5-10 проб сыворотки от каждой возрастной группы. На партию проб сыворотки, на­правляемой для исследования, оформляют сопроводительный документ.

Выявление, идентификация типовой специфичности и количественное определение AT к ВЯ в РРИД, РПСК, РНСК и НИФ могут проводиться в условиях обычных ветеринарно-диагностических лабораторий и не требует создания более строгого санитарного режима, поскольку проводятся с неинфекционными материалами.

Для обнаружения ингибиторных (неполных) AT применяют РНСК. Эти AT отличаются высокой авидностью. Они формируют комплекс АГ-АТ, не адсорбирующий комплемент. Связываясь с АГ быстрее полных AT, они блокируют его, но не связанный при этом комплемент в присутствии гемолитической сыворотки вызывает лизис эритроцитов. Ингибиторные AT обнаружены сейчас при многих инфекциях, в том числе при яшуре. Дан­ная реакция применяется для определения типов ВЯ по сывороткам переболевших живот­ных, а также для обнаружения постинфекционных и поствакцинальных AT.

Типирование ВЯ по сывороткам переболевших животных в РДП. В реакции ис­пользуют: АГ из очищенного и концентрированного лапинизированного ВЯ типов О, А, С и др.; сыворотки от переболевших ящуром животных (не пригодны для исследования в РДП сыворотки крови животных, дважды переболевших ВЯ различных типов), типоспецифиче-ские сыворотки; агаровая среда.

Постановка реакции: в центральные лунки 7-ми 6-угольных систем на агаровых пла­стинках помещают соответствующие АГ типов О, А, С и др. В периферические лунки поме­щают пробы испытуемых и контрольных сывороток. Затем пластинки выдерживают во влажной камере при 37°С. Реакцию учитывают через 16, 24, 48 и 72 ч после постановки. Положительная реакция характеризуется образованием одной или двух четких линий пре­ципитации между лункой с АГ и сывороткой. ВЯ относят к тому типу, с АГ которого испы­туемая сыворотка дает положительную реакцию. В случае обнаружения в сыворотках преципитирующих AT к 2 и более типам вирус относят к тому типу, с АГ которого испытуемые сыворотки дают наибольший процент положительных реакций.

РРИД. Сущность её заключается в формировании зоны специфической преципитации вирусных антигенов антителами, включенными в состав агарового геля. Реакция является типоспецифичной, позволяет провести исследования по типированию и количественному определению постинфекционных и поствакцинальных AT.

Компоненты реакции: 1) антигены эталонные 7 типов ВЯ и других везикулярных болез­ней (ВВС 0-72 и Т-75, БЭС А-48 и С-72, ВС Индиана и Нью-Джерси); 2) сыворотки эталон­ные 7 типов ВЯ и других везикулярных болезней (ВВС 0-72 и Т-75, БЭС А-48 и С-72, ВС Индиана и Нью-Джерси); 3) агар белый или импортный фирм "Серва" или "Дифко", азид натрия или кислота карболовая, вода дистиллированная, БФР с рН 7,2-7,4. AT, обнаружен­ные в испытуемой пробе сыворотки, относят к тому серотипу, с АГ которого они дали поло­жительную реакцию. Их предельным титром считают максимальное разведение испытуемой сыворотки, с которым наблюдается положительная реакция. Титры сыворотки, полученные от вакцинированных животных, зависят от активности использованной вакцины, кратности и сроков ее применения и физиологических характеристик животного (возраст, вид). У 1-кратно вакцинированного против ящура взрослого КРС обычно титры через 30-90 дн после введения вакцины находятся в диапазоне 1:20-1:80, а после 2-кратной иммунизации в эти же сроки титр возрастает до 1:80-1:160. Титр у молодняка, как правило, в 2-3 раза ниже, чем у взрослых животных. У свиней и овец титры ниже, чем у КРС. После переболевания животных титры значительно выше, чем после вакцинации, и обычно превышают 1:160.

Встречный ИЭФ. Может быть с успехом использован для серотипирования ВЯ. Чувст­вительность его такая же, как и РДП, но учет результатов производится через 1,5 ч, тогда как реакция иммунодиффузии требует не менее 24 ч.

НИФ. При ящуре позволяет проводить дифференциацию AT переболевших животных от вакцинированных. Выявление в НИФ специфического свечения свидетельствует о наличии в испытуемой сыворотке постинфекци­онных антител, т.е. о переболевании животного ящуром.

С помощью РНГА определяют напряженность поствакцинального иммунитета у КРС. Установлена корреляция результатов, полученных при РПГА и РН. С помощью монАТ в РН или ELISA определяют не нейтрализуемые варианты ВЯ. В зависимости от чувствительно­сти к монАТ все варианты ВЯ разделены на 3 группы. Варианты 1-й группы имели мутации преимущественно в области 140-160 VP1; варианты 2-й и 3-й групп мутируют в области 204 VPI и 70, 139, 195 VP3 соответственно. Определены две большие АГ зоны вируса: чувстви­тельная и нечувствительная к трипсину (VP1 140-160 и VP3 соответственно).

Реакция серозащиты на мышатах-сосунах. Используется для определение типа ВЯ по сывороткам животных-реконвалесцентов. Для постановки реакции используют эталонные (адаптированные к организму 4-7-дн мышат-сосунов) штаммы БЯ различных типов. Шгам-мы должны быть типоспецифическими и иметь титр на мышатах-сосунах не ниже 7 lg в 1 г.

ВЯ, вызвавший заболевание животных, относят к тому типу, при заражении которым привитые сывороткой мышата остались живы. Необходимым условием достоверной оценки реакции серозащиты является обязательная гибель контрольных мышат, которым введен вирус, в то время как контрольные мышата, которым вводили только испытуемую сыворот­ку, должны выжить.

РН в культуре клеток. Для постановки РН необходимо иметь 24 пробирки культур клеток. Отсутствие ЦПД в пробирках, в которые внесена смесь вируса с сывороткой, при четко выраженном ЦЛД в контрольньгх пробирках, указывает на наличие в исследуемой сыворотке AT против данного типа ВЯ. Специфичность ЦПД можно установить путем ис­следования в РСК культуральной жидкости, полученной из пробирок с выраженным ЦПД.

Дифференциальная диагностика. При дифференциальной диагностике ящура необхо­димо исключить ВС, ВЕС, БЭС, катаральную лихорадку овец. Для дифференциальной ди­агностики в лабораториях используют диагностические наборы, выпускаемые биологиче­ской промышленностью, для яшура и ВБС.

Иногда в материале от людей, подозреваемых в заболевании ящуром, выделяли возбу­дителя энтеровируснои инфекции человека - вирус Коксаки серотипа В. Вирус вызывал ви­димое ЦПД в перевиваемых культурах клеток в течение 24 ч, имея икосаэдрическую форму, размером 20-30 нм и вызывал гибель мышат при интрацеребральном заражении.

 

Date: 2016-02-19; view: 517; Нарушение авторских прав; Помощь в написании работы --> СЮДА...



mydocx.ru - 2015-2024 year. (0.006 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию