Питательные среды. Транспортная среда Кери-Блер

Транспортная среда Кери-Блер. Тиогликолат натрия — 1,5 г; фосфат натрия двузамещенный — 1,1 г; хлорид натрия — 5 г; агар 1,6 г; дистиллированная вода — 991 мл. Уста­навливают рН среды 8,4, стерилизуют текучим паром 4 мин.

Транспортная среда для C.fetus. Свежая сыворотка крови крупного рогатого скота с содержанием в 1 мл: 5-флуорацил — 300 мг; полимиксин В сульфат — 100 ЕД; бриллиантовый зеленый — 50 мкг; налидиксовая кислота — 3 мкг; циклогексимид — 100 мкг.

Смесь разливают в 30 мл флаконы по 10 мл, закрывают резиновой проб­кой, помещают на 2 минуты в кипящую водяную баню для затвердевания. После охлаждения среду перемешивают стеклянной палочкой, прокалыва­ют пробку иглой, переносят флакончики в емкость, содержащую 2,5% 0₂, 10% С0₂,87,5% N₂. Иглу удаляют после помещения флакона в сосуд. Среду хранят при 4°С, используют не ранее чем через неделю в течение 3 месяцев.

Среда Скирроу для выделения C.fetus. Состав: кровяной агар № 2 (Oxoid CM 271) — 1000 мл; лизированная дефибринированная овечья кровь — 50 мл; ванкомицин —10 мг; полимик­син В —2500 ЕД; триметоприм — 5 мг. Автоклавированныи кровяной агар охлаждают до 5° С, добавляют другие компоненты. Селективная добавка Скирроу (ванкомицин, полимиксин В, триметоприм) в указанных пропор­циях может быть внесена в другую подходящую как основу среду.

Жидкая обогатительная среда. Состав: питательный бульон № 2 — 25 г; дистиллированная вода — 1000 мл; лизированная кровь лошади — 70 мл; ванкомицин — 10 мг; поли­миксин В — 2500 ME; триметоприм — 25 мг.

Модифицированная обогатительная среда Престон. Состав: питательный бульон № 2— 25 г; дистиллированная вода — 1000 мл; лизированная кровь лошади — 50 мл; полимиксин В — 5000 ME; триметоприм —10 мг; рифампицин —10 мг; циклогексимид —100 мг; суль­фат железа — 0,025%; метабисульфит натрия — 0,025%; пируват натрия — 0,025%.

Сафранин-железо-новобиоционовая среда. Приготовление экстракта мышцы сердца. Сердце крупного рогатого скота освобождают от жира, пленок, клапанов и пропускают через мясо­рубку. 1 кг фарша настаивают в 2 л водопроводной воды в течение 24 часов. Затем кипятят в течение
1 часа, после чего доливают дистиллиро­ванную воду до первоначального объема. Фильтруют среду через бумаж­ный фильтр, разливают по колбам и стерилизуют при 1 атм 30-40 минут.

Приготовление печеночной воды. Свежую печень крупного рогатого ско­та освобождают от жира, канальцев и режут на небольшие кусочки.
1 кг печени кипятят в 1 л водопроводной воды в течение 1 часа. После чего доливают дистиллированную воду до первоначального объема. Фильтру­ют через бумажный фильтр, разливают по колбам и стерилизуют при 1 атм 30-40 минут.

Приготовление полужидкого агара. Берут 250 мл экстракта из мышцы сердца, 250 мл печеночной воды и 500 мл дистиллированной воды. К этой смеси добавляют 10 г пептона, 5 г поваренной соли и кипятят
15 минут, доводят до первоначального объема дистиллированной водой, устанавли­вают рН 7,1-7,2, добавляют 1,5-2 г агар-агара и кипятят
15 минут до полного растворения агар-агара.

Приготовление среды. Предварительно в отдельных темных флаконах готовят следующие водные (на дистиллированной воде) раство­ры:
2%-ный раствор сернокислого закисного железа (FeS0₄ x7H₂0); 0,5%-ный раствор сафранина Т; 0,2%-ный раствор новобиоцина (при наличии новобиоцина в таблетках одну таблетку, содержащую 125 тыс. ЕД, ра­створяют в 62,5 мл дистиллированной воды, что соответствует 0,2%-ному раствору). Указанные растворы можно хранить в холодильнике (при 4°С) в течение месяца. К 985 мл полужидкого агара добавляют 5 мл 2%-ного ра­створа сернокислого железа, 5 мл 0,5%-ного раствора сафранина Т и
5 мл 0,2%-ного раствора новобиоцина, тщательно перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр. Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизу­ют при 0,8 атм 25 минут. После стерилизации рН среды равен 6,8, цвет розовый. Пробирки со средой хранят при комнатной температуре (не выше 25°С), в темном месте в полиэтиленовых пакетах. При этих условиях среда пригодна для употребления в течение месяца.

Плотная среда ВИЭВ. Приготовление компонентов среды. Отвар из мозга крупного рогатого скота. Свежий мозг крупного рогатого скота освобождают от оболочек, пленок и измельчают на мясорубке. К 1 кг фарша добавляют 1 л водопро­водной воды, настаивают в течение 18-24 часов, затем кипятят в течение 1 часа. После кипячения доливают дистиллированной воды до первона­чального объема, фильтруют через 2 слоя марли, разливают по колбам и стерилизуют при 1 атм в течение 30-40 минут.

В отдельных темных флаконах готовят на дистиллированной воде
0,5%-ный раствор сафранина Т и 0,2%-ный раствор новобиоцина. Растворы год­ны для применения в течение 1 месяца, при условии хранения в холодильни­ке при 4-6° С.

Приготовление среды. Смешивают 745 мл сердечного (см. выше) и 245 мл мозгового отвара. К полученной смеси добавляют 10 г пептона, 5 г поваренной соли, 20 г агар-агара, 1 г цистеина, по 5 мл приготовленных растворов сафранина Т (25 мкг/мл) и новобиоцина (10 мкг/мл). Среду разливают во флаконы и стерилизуют при 0,8 атм в течение 25 минут. После автоклавирования рН среды 6,8-7,0. В таком состоянии среду хранят при комнатной температуре в течение 2 недель. Перед употреблением среду расплавляют, охлаждают до 45-50°С, добавляют в нее 10% дефибринированной крови барана или крупного рогатого скота и разливают в чашки Петри по 20 мл.

Полужидкий агар ВГНКИ с 1% глицина. В смесь, состоящую из 500 мл водопроводной, 250 мл мясной и 250 мл печеночной воды, вносят 10 г пептона, 2 г агара. Кипятят до полного раство­рения агара (15-20 минут). Устанавливают рН 7,3-7,4. Добавляют 10 г глицина, 35 г хлорида натрия, 10 мл желчи, 1-3 мл раствора бриллиан­тового зеленого 1:1000, разливают и автоклавируют при 115°С 30 минут.