Идентификация кампилобактерий на уровне вида, биовара

Обнаружение бактерий, проявляющих микроаэрофильный рост и об падающих типичными для кампилобактерий морфологией и тинктори альными свойствами, дает основание для изучения других признаков, позволяющих уточнить родовую и видовую принадлежность культур рост при 25°С и 42°С, на среде с 1,5% NACI, 1% глицина, 1% бычьей желчи, чувствительность к налидиксовой кислоте и цефалотину, а так же гидролиз гиппурата, образование сероводорода, щелочной фосфата зы, редукцию нитратов (табл. 88). Применяют тест-систему APICampy (Bio Meriex)

Культивирование при 25°С и 42°С позволяет дифференцировать возбу дителей генитального кампилобактериоза (подвиды С. fetus), а также
С. cryaerophila от «термофильных» представителей рода, способных расти при 42°С. Ряд штаммов С. fetus subsp. fetus могут расти при 42°С.

Идентификацию выделенных культур также проводят в реакции аг­глютинации с диагностическими сыворотками и в реакции иммунофлуо-ресценции.

Серологическая идентификация выделенных культур кампилобактерий. Отечественные диагностические лаборатории обеспечиваются кампилобактериозными агглютинирующими сыворотками, предназначенными для идентификации возбудителей генитального кампилобактериоза (С. fetus subsp.fetus, С. fetus subsp. venerialis) и дифференциации их от непатогенного вида С. sputorum.

Идентифицируемые, адаптированные (прошедшие 2-3 пассажа на пи­тательных средах) культуры выращивают 2-3 суток на ПЖА, затем вы­севают для накопления необходимого количества бактериальной массы на питательную плотную среду в чашках Петри следующего состава: мясная вода — 25%, печеночный настой — 25%, вода — 50%, 0,5% на­трия хлорида, 1% пептона, 2-3% агар-агара (вес/объем). Среду стерили­зуют при 115°С 30 минут, охлаждают и добавляют 10% крови барана или 20% стерильного обезжиренного молока (объем/объем). Посевы инкуби­руют в микроаэрофильнах условиях 2-3 суток. Бактериальную массу смывают формализированным раствором (0,3%) натрия хлорида (0,8%). Бактериальные клетки двукратно отмывают аналогичным раствором пу­тем двукратного центрифугирования (3000 об/мин). По оптическому стан­дарту мутности устанавливают концентрацию бактериальной взвеси 1 млрд.м.к. в 1 мл. Идентификацию культур проводят в РА на стекле и в пробирках.

РА на стекле. Используют для ориентировочной идентификации.

Иммунные сыворотки против С.sputorum subsp.bubulus, C.fetus subsp. fetus С. subsp. venerealis разводят изотоническим раствором NaCI 1:50. Вкачестве контроля используют стерильный физиологический раствор. Для и окончательной идентификации испытуемую культуру исследуют в пробирочной РА с перечисленными сыворотками, разведенными на 3%-ном растворе NaCI с 0,3% формалина в разведениях 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 (обьем 0,5 мл). К каждому разведению добавляют 0,5 мл приготовленного антигена (500 млн.м.к.). В качестве контроля используют аналогичные разведения нормальной сыворотки кролика.

Пробирки с компонентами выдерживают при 37°С 24 часа, 3-4 часа при комнатной температуре и учитывают результат по обычной
4-балльной системе. При отсутствии агглютинации в контроле испытуемую культуру относят к тому виду (подвиду), с сывороткой против которого получен положительный результат. Культуры, имеющие признаки диссоциации, могут агглютинировать с несколькими сыворотками. В последнем случае опыт по­теряют, используя разведения сывороток до их предельного титра. Выделенные культуры бактерий могут быть идентифицированы с аналогичными люминесцирующими сыворотками в прямой реакции иммунофлуоресценции.

Метод флуоресцирующих антител. Для серологической идентифика-

ции возбудителей генитального кампилобактериоза в чистой и смешанной культурах может быть применен прямой метод флуоресцирующих антител с использованием коммерческих кампилобактериозных люминесцирующих сывоороток: бивалентной — против C.fetus сероваров 1 и 2, моновалентной – против C.sputirum subsp. bubulus.

Биопроба. Используют преимущественно для очистки смешанных культур при диаг­ностике генитального кампилобактериоза. Морских свинок массой 250-300 г заражают внутрибрюшинно, вводя 1,0-1,5 мл смешанной культуры кампилобактерий. Через 5-10 минут из сердца берут кровь и высевают в 6-8 пробирок с ПЖА. При значительной контаминации возможно проведение нескольких пассажей.

Белым мышам культуру вводят внутрибрюшинно в дозе 0,3-0,5 мл. Через 3-4 дня животных убивают и кровь из сердца, материал из печени, селезенки, рогов матки высевают на питательные среды.

Крупным белым мышам культуру в дозе 0,1 мл вводят пипеткой в ваги­ну. Через 24 часа заражение повторяют. Через 6-7 дней мышей убивают, вырезают стерильно кусочки рогов матки и засевают материал в пробирки с ПЖА.

Беременным морским свинкам вводят внутрибрюшинно или во влага­лище 0,5 мл культуры. При аборте производят посевы из абортированных плодов. Если аборт не происходит, животных убивают и делают посевы из эмбрионов и слизистой матки.