Стимулирующая ростовая добавка для выращивания B.nodosus

а) Раствор гемина: 50 мг гемина растворяют в 1 мл I N NaOH, добавля­
ют 100 мл воды, автоклавируют при 121° С 15 минут.

б) Раствор витамина К (менадион): 100 мг менадиона растворяют в
20 мл 95%-ного этанола и стерилизуют фильтрацией.

в) смешивают 1 мл менадиона и 100 мл гемина. К 100 мл питательной
среды добавляют 1 мл смеси.

г) В питательную среду вносят 0,5% дрожжевого экстракта.
Питательная среда с селективными свойствами.

Базовая среда Brucella-агар, селективные добавки: канамицин —75 мкг/ мл, ванкомицин — 75 мкг/мл.

Плотная среда в модификации Бектимирова. Тщательно очищенные от волосяного покрова голяшки овец вместе с роговым башмаком копытец заливают водопроводной водой и варят в зак­рытой кастрюле 2-3 часа до отделения тканей от костей. Полученный бульон фильтруют через бельтинг-ткань или ватно-марлевый фильтр. До­бавляют 0,5% пептона, 0,5% хлорида натрия и 2% агара. Кипятят до полно­го растворения агара, устанавливают рН 7,6 и стерилизуют при 120° С 30 минут. В расплавленную и остуженную до 45-50° С среду вносят асеп­тически 0,05% солянокислого цистеина (в виде 2%-ного раствора), 20% среды № 199,20%о дефибринированной крови лошади. Посевы инкубиру­ют в атмосфере углекислого газа.

Жидкая среда в модификации Бектимирова. Смешивают 650 мл бульона из голяшек овцы и 300 мл экстракта голов­ного мозга, добавляют 10 г пептона, 50 мл экстракта копытного рога, 5 г хлорида натрия. Стерилизуют при 120° С 30 минут и разливают по пробир­кам. Культивирование проводят в анаэростате в течение 24 ч.

Приготовление экстракта из головного мозга. Головной мозг овцы или крупного рогатого скота заворачивают в марлю, заливают водой и кипятят 15-20 минут, после чего выжимают и растирают в небольшом количестве мясо-пептонного печеночного буль­она (МППБ) до получения кашицеобразной массы. Полученную массу суспендируют в МППБ в соотношении 1:9 и автоклавируют при 120° С 30 минут. Отстоявшуюся после автоклавирования смесь центрифугиру­ют, надосадочную жидкость стерилизуют через фильтр Зейтца и хранят при 4° С.

Приготовление экстракта копытного рога. Копытный рог овцы высушивают и тонко измельчают до получения по­рошка, смешивают
1 часть порошка и 9 частей 0,8%-ного раствора хлори­да натрия. К полученной смеси добавляют 20% трипсина и инкубируют в течение 2-3 суток при 37° С, поддерживая рН 7,5-7,8. Смесь нагревают до 60° С, после чего фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизу­ют через фильтр Зейтца.