Выделение и идентификация культуры возбудителя. Культивирование. Возбудитель — строгий анаэроб, оптимальное разрежение — 4 -10 мм ртутного столба, температурный оптимум 36-37° С

Культивирование. Возбудитель — строгий анаэроб, оптимальное разрежение — 4 -10 мм ртутного столба, температурный оптимум 36-37° С, рН 7,4-7,6, лучше растет на средах с добавлением крови, сыворотки крови, глюкозы, лактозы, дрожжевого экстракта.

Первичные посевы обычно производят на плотные питательные среды с последующей отвивкой культур на жидкие среды. Из жидких сред посев материала проводят на среду Кита-Тароцци, мартеновский бульон, луч­ше с добавлением 10% стерильной крови барана или крупного рогатого скота, а также 0,4% глюкозы. Используют тиогликолатный бульон с К-геминовой добавкой. Посев на жидкие среды целесообразно проводить при малом содержании возбудителя в исследуемом материале, с последующим высевом культуры на плотные среды. Для лучшего роста в жидкие пита­тельные среды добавляют 0,4% глюкозы и витаминную
К-геминовую до­бавку, сыворотку крови. Перед использованием среды обязательно выдер­живают в течение 20-30 минут в кипящей водяной бане и охлаждают до 37-38° С. По данным Я.Р.Коваленко, F.necrophorum растет в стерильной сыворотке крови. Из полужидких сред может быть использован ПЖА по Муромцеву с добавлением 5-10% сыворотки крови, 2% глюкозы, 0,2% цистина.

В качестве плотных сред для первичной изоляции возбудителя применя­ют глюкозный (1%), сывороточный (10-20%) агар, глюкозо-кровяной агар. Агаровые среды готовят непосредственно перед посевом или выдержива­ют перед использованием в течение 6-24 часов в анаэробных сосудах. С целью стимуляции роста возбудителя рекомендуется добавлять дрожжевой экстракт, витамин К и гемин. Для создания условий анаэробиоза использу­ют общепринятые методы: культивирование на жидких средах под слоем вазелинового или парафинового масла, добавление в среды редуцирую­щих веществ, на плотных средах в анаэростатах с удалением воздуха при помощи вакуумного насоса до необходимой степени разрежения или заме­ной воздуха газовой смесью (Н₂ - 10%, СО₂ - 5%, N₂ — 85%) либо с ис­пользованием газ-пакетов (см. «Культивирование анаэро­бов»).

При исследовании загрязненного посторонней микрофлорой материа­ла рекомендуют для подавления протея добавлять к агару 5,5-6% этанола (95%) перед его разливом в чашки Петри. На такой среде протей теряет способность к ползучему росту и образует округлые, выпуклые, с ровными краями колонии. Культивирование посевов проводят при 36-37° С в течение 5-7 суток, с ежедневным про­смотром.

На сывороточно-глюкозном агаре через 48-72 часа инкубирования воз­будитель формирует очень мелкие росинчатые колонии диаметром до 1 мм, которые через 4-5 суток достигают диаметра 2-3 мм. Колонии округлые или продолговатые, с гладкой блестящей поверхностью, ровными или слег­ка зазубренными краями, в центре небольшое углубление, структура мелко­зернистая, цвет серовато-белый или зеленоватый до желтоватого. При выра­щивании на кровяных агаровых средах (кровь кролика) гемолитическая ак­тивность варьирует, гемолиз типа β или а. Колонии легко снимаются с по­верхности среды и эмульгируются в физиологическом растворе. При культи­вировании на желточном агаре большинство штаммов проявляют липазную, но не лецитиназную активность. При посеве методом заливок в глубине глю-козного агара на 4-5-е сутки образются небольшие чечевицеобразные серо­вато-белые колонии. Величина и форма колоний зависят от плотности агара. В сывороточном агаре через 2-3 суток формируются непрозрачные четко контурированные колонии с видимыми под малым увеличением микроскопа отходящими нитями.

На полужидком печеночном агаре (0,15%) через 24-72 часа инкубиро­вания возбудитель растет в виде облачка с интенсивным помутнением сре­ды и заметным газообразованием. На мозговой среде возбудитель растет хорошо, после добавления к среде раствора сернокислого железа происхо­дит ее почернение ввиду выделения возбудителем сероводорода. В среде Кита-Тароцци рост наблюдается через 15-48 часов инкубирования в нижних слоях питательной среды, позднее — в верхних. Через 9-
10 часов среда просветляется, на кусочках печени фор­мируется ватообразный налет, разбивающийся при встряхивании в равно­мерную взвесь. Слабое газообразование отмечается только на ранней ста­дии роста культуры. Для улучшения роста возбудителя в среду добавляют 10% крови или сыворотки крови крупного рогатого скота или барана. В стерильной сыворотке крови F.necrophorum через 24-48 часов инкубиро­вания растет в виде сероватых нитевидных хлопьев по всему столбику сре­ды, с последующим формированием осадка.