Бактериологическое исследование. Для исследованияприжизненно берут соскобы на границе здоровой и некротизированной тка­ни из области венчика

Для исследованияприжизненно берут соскобы на границе здоровой и некротизированной тка­ни из области венчика, межкопытной щели, ротовой полости, ноздрей и т.д. Трупы мелких животных доставляют в лабораторию целиком, от круп­ных животных — паренхиматозные органы и ткани с некротическими оча­гами. Следует учитывать, что материалы из кожных поражений, слизистой ротовой и носовой полостей, трахеи, гортани, кишечника, содержат дру­гие анаэробные грамотрицательные бактерии из категории представите­лей нормальной микрофлоры и не только рода Fusobacterium, что значи­тельно осложняет исследование. По указанной причине вероятность выде­ления культуры возбудителя выше, если объектом исследования является гной из абсцессов, жидкость из пораженных суставов, грудная или перитонеальная жидкость, внутренние органы с поражениями. Возбудитель отли­чается слабой устойчивостью, поэтому образцы материала в лабораторию необходимо направлять в кратчайшие сроки, желательно в анаэробных контейнерах. Для транспортировки образцов под­ходит модифицированная транспортная среда Cary-Blair. Материал луч­ше транспортировать и хранить при температуре выше температуры холо­дильника, так как при низких температурах кислород сорбируется сильнее. В любом случае материал должен быть подвергнут исследованию в течение нескольких часов после взятия.

В соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диаг­ностике некробактериоза» (М., 1985) материал для лабораторного иссле­дования направляют в свежем виде или консервируют 30%-ным раствором глицерина.

Микроскопическое исследование исходного материала. Мазки окрашивают по Граму, методу С.Н.Муромцева и Л.Новиковой (цит. по Львову В.М., 1960). В последнем случае препараты фиксируют спирт-формалином (4:1) в течение 10 минут и затем 30 секунд окрашивают ра­створом фуксин-синьки. Микроскопическая картина: фон — фиолетово-розовый, бактерии — сине-голубые. Приготовление красителя: основной фуксин — 0,15 г, этанол 95° — 20 мл, фенол — 10 мл, метиленовый синий — 0,25 г, вода — 200 мл.

Четкая микроскопическая картина получается при фиксации мазков спирт-эфиром и окрашивании в течение 2-3 секунд фуксином Циля. Мо­жет быть использована окраска по Романовскому-Гимза. В мазках-отпе­чатках из исследуемого материала F.necrophorum имеет форму длинных, иногда переплетающихся, неравномерно окрашенных грамотрицательных нитей, длиной 10-100 и более мкм, шириной 0,75-1,0 мкм. Длинные нити часто имеют утолщения. Кроме нитей обнаруживаются единично располо­женные палочковидные клетки или цепочки из нескольких клеток, концы могут быть округлыми или заостренными. Нитевидные формы преоблада­ют в пораженной ткани на границе со здоровой. Ближе к здоровой ткани количество нитей уменьшается. В мазках, сделанных из центра некроти­ческого фокуса, возбудитель обычно обнаруживается в виде коротких па­лочек, нити встречаются реже. В мазках из плевральной и перикардиальной жидкости возбудитель имеет преимущественно форму длинных нитей.

В мазках из материала могут быть выявлены клетки F.pseudonecrophorum, которые чаще имеют форму правильных коротких палочек или кокков. F.russii обнаруживается в форме нитей, без утолще­ний, концы заостренные. Короткие и кокковидные клетки, как правило, не встречаются.

F.simiae обычно имеет форму палочек с заостренными концами, клеток с утолщениями и колбовидных форм нет. F.necrogenes и F.gonidiaformans по морфологии идентичны F.necrophorum. F.naviforme преимущественно имеет форму правильных палочек с заостренными концами.

Кроме того, в материале из пораженных конечностей вероятно присут­ствие бактерий из рода Bacteroides — Bacteroides nodosus, клетки которого грамотрицательные, размером 1,7x3-6 мкм, нередко с утолще ниями на одном или обоих концах, располагаются единично или парами; Bacteroides melaninogenicus имеет форму грамотрицательных палочек (0,5-0,8x0,9-2,5 мкм), иногда в виде коротких нитей; Bacteroides fragilis и Bacteroides levii имеют форму грамотрицательных палочек размером 0,6 -1,3x1,6-8 мкм, располагающихся единично, парами. Таким образом, в окрашенных препаратах из контаминированного материала могут присут­ствовать сходные по морфологии и тинкториальным свойствам бактери­альные клетки. Клетки F.necrophorum имеют определенное сходство не только с фузобактериями и бактероидами, но и с клетками некоторых грамположительных бактерий родов Eubacterium и Clostridium, которые при окраске по Граму легко обесцвечиваются.