Выделение и идентификация бордетелл

Культивирование. Бордетеллы — строгие аэробы, температурный оптимум 37-38° С, рН питательных сред 7,2-7,6. Посев исследуемого материала проводят на кровяной, сывороточной агар, агар Мак-Конки. Поскольку объектом ис­следования чаще всего является контаминированный посторонней микро­флорой материал (носовая, трахеальная слизь), то предпочтительнее посев производить на элективные среды. При этом необходимо учитывать, что при наличие в материале бактерий, расщепляющих углеводы, может тормозить рост бордетелл, так как бордетеллы требуют слабощелочных или нейтраль­ных значений среды, а контаминанты закисляют ее. Из числа элективных сред для изоляции В. bronchiseptica используют кровяной агар с клиндами-цином и неомицином, пенициллиннитрофурантоиновый агар, среду Мак-Конки, среду Smith и Baskerville с гентамицином, пенициллином, фуранта-доном (SB-среда). B.avium на SB-среде культивируют без внесения антиби­отиков. Посевы инкубируют в условиях обычной атмосферы в течение 24-48 часов.

B.bronchiseptica на кровяном (овца, лошадь) агаре формирует через 24 часа очень мелкие, выпуклые, с гладкой поверхностью и ровными краями колонии, обычно с зоной β-гемолиза. В наибольшей степени гемолитичес­кая активность выражена на среде Борде-Жангу (рН 6,2-6,8). Колонии B.avium аналогичного типа, но обычно негемолитичные. На МПА свеже-выделенные культуры образуют гладкие, полупрозрачные, с блестящей по­верхностью колонии диаметром 0,2-1,5 мм, которые позднее (48-72 часа) становятся серо-белыми. В зависимости от культуральных вариаций могут быть выявлены колонии трех типов: S-форма — 1-й тип, SR-форма — 2-й тип, R-форма — 3-й тип. На агаре Гартоха колонии имеют беловатый цвет, на агаре Мак-Конки колонии мелкие, с розоватой периферией и светлым центром. На селективной среде Smith-Baskerville (SB-среда) колонии

B.bronchiseptica и В. avium через сутки инкубирования имеют размер около 0,5 мм, голубой цвет и с голубым окрашиванием среды вокруг колонии, что свидетельствует о защелочении рН в зоне роста, позднее колонии дос­тигают размера 1,5-2,0 мм. Сходные по культуральным признакам сахаролитические бактерии вызывают закисление рН, поэтому колонии и окру­жающая среда приобретают желтоватый цвет. В жидких питательных сре­дах (сывороточный МПБ) бордетеллы растут с равномерным помутнением среды, в последующем образуется осадок и пристеночное кольцо, среда становится прозрачной.

Морфология клеток бордетелл в культуре. Морфология клеток в окрашенных препаратах из культур и патологи­ческого материала сходна. Капсул не образуют. B.bronchiseptica и B.avium, в отличие от В.parapertussis и B.pertussis, имеют жгутики, поэтому обяза­тельно исследуют выделенную культуру на подвижность.

Идентификация бордетелл на уровне рода. Бактерии рода Bordetella по морфологическим и тинкториальным свойствами сходны с бруцеллами, гемофильными бактериями и вида­ми рода Alcaligenes. Для дифференциации от этих бактерий исследуют способность к росту в анаэробных условиях (гемофилы являются фа­культативными анаэробами); ферментацию углеводов (бордетеллы не закисляют среды с углеводами); потребность в никотинамиде (борде­теллы зависят от этого ростового фактора); редукцию нитратов (бор­детеллы и гемофилы всегда редуцируют нитраты); окисление амино­кислот (бордетеллы, в отличие от гемофильных бактерий, окисляют аминокислоты); редукцию тетразолия (бордетеллы, в отличие от видов рода Alcaligenes, редуцируют этот субстрат); утилизацию цитратов (В.hronchiseptica использует цитраты); защелочение лакмусового мо­лока (защелачивают бордетеллы и алкалигенес); способность к росту в питательных средах, содержащих 320 мг/л теллурита калия (борде­теллы не растут). Данные дифференцирующие признаки представлены в таблице 77.

Таблица 77 - Дифференциальные признаки бактерий рода Bordetella