Pasteurellaceae и рода Yersinia

¹⁾ Исключение — Н. haemoglobinophilus; P — признак различен в

²⁾ Исключение — P. multocida и P. haemolytica; таксонах рангов (виды рода,

³⁾ Исключение — Н. aprophilus и Н. parasuis; роды семейства); нд — нет данных

⁴⁾ Исключение — Н. parasuis

Идентификация пастерелл на уровне вида

Для видовой дифференциации пастерелл рекомендуется исследовать у куль­туры способность к росту на агаре Мак-Конки, образовывать бета-гемолизин, орнитин-декарбоксилазу, уреазу, индол, кислоту из глюкозы, лактозы, саха­розы, мальтозы, маннита. Биохимическую идентификацию можно проводить при помощи тест-системы API20 NE (Bio Mericx) и др.

Таблица 71 - Основные дифференцирующие признаки видов рода Pasteurella

(+) — преимущественно положительный результат; (-) — преимуществен­но негативный
результат; + * — газ и кислота из глюкозы; нд — нет ден­ных; ¹⁾- P. avium требует для роста на питательных средах НАД.

После установления видовой принадлежности пастерелл, если выделе­ны культуры P. multocida и P. haemolytica, можно установить подвид P. muitocida или биовар P. haemolytica, что позволяет, ис­пользуя эти признаки в качестве маркера возбудителя, более детально про­водить анализ эпизоотической ситуации.

Идентификация серовариантов P. multocida

Определение сероваров возбудителя является обоснованием для исполь­зования вакцин, включающих конкретный серовар P. multocida. Серотипирование основано на антигенных различиях капсульного вещества (полиса­харид), в соответствии с чем P. multocida подразделяют в РНГА на 5 серова­ров (А, В, D, Е и F). По особенностям соматического антигена P. multocida также дифференцируют на серовары, которые обозначают цифрами.

В практических условиях дифференциация сероваров возбудителя в РНГА, из-за отсутствия коммерческих реагентов, пока недоступна, и по­этому прибегают к несерологическим методам, основанным на иных осо­бенностях клеток пастерелл.

Поскольку серовар Е встречается в Африке, а серовар F выделен у ин­деек, то реально речь идет об установлении сероваров А, В и D. С этой исследуемую культуру пастерелл засевают на агар Хоттингера в шинках Петри с таким расчетом, чтобы был получен достаточно густой шсг изолированных колоний.

Одновременно, вслед за этим посевом по диаметру чашки одной пря­ной линией высевают бактериологической петлей бульонную культуру из штамма S. aureus, способного продуцировать фермент гиалуронидазу, и обычно сопряжено с хорошо выраженной гемолитической активностыо.

Таблица 72 - Критерии дифференциации подвидов P. multocida

V — варьирующий признак.

Посевы инкубируют при 37° С в течение 18-24 часов и просматри­вают в косопроходящем пучке света в стереоскопическом микроскопе МБС-1.

Колонии P. multocida серовара А, из-за расщепления гиалуронидазой стафилококка гиалуроновой кислоты в капсуле пастерелл, в отличие от колоний от сероваров В и D, тусклые, имеют серый или голубой цвет и не флуо­ресцируют.

Если испытуемая культура не относится к серовару А, то ее исследу­ют в трипафлавиновой пробе, которая, в принципе, предназначена для выявления у бактерий признаков диссоциации. Испытуемую культуру выращивают 24 часа при 37° С в 3-5 мл бульона Хоттингера, центри­фугируют, осадок удаляют, седимент ресуспендируют в оставшейся жидкости и добавляют в пробирку 0,5 мл свежеприготовленного раство­ра трипафлавина (акрифлавин) 1:1000. Компоненты перемешивают и выдерживают 10-20 минут при комнатной температуре. Если взвесь бактерий стабильна, культуру относят к серовару В, выпала в осадок — к серовару D.

Таблица 73 - Критерии дифференциации биоваров P. haemolytica