Выделение и идентификация культур пастерелл

Культивирование. Пастереллы — факультативные анаэробы, температурный оптимум 37° С (диапазон 25-40° С), птичьи штаммы растут при 42°С, оптимум рН пита­тельных сред 7,2-7,4. Для первичного культивирования используют обыч­ные МПА, МПБ, бульон и агар Хоттингера, но лучше — обогащенные сре­ды: кровяной, сывороточный агар и бульон. Следует отметить, что большин­ство штаммов P. avium обладают потребностью в НАД и для культивирова­ния этого вида пастерелл необходимо использовать специальные питатель­ные среды (см. «Гемофильные бактерии»). Для выделения пастерелл из носо­вой слизи целесообразно использовать элективную среду с клиндамицином. P. anatipestifer требует для своего роста обогащенные среды и 5, 10% СО₂. Инкубирование посевов проводят в течение 24-48 часов, при отсутствии роста — до 4-5 суток.

P. multocida на жидких средах растет с их равномерным слабым помут­нением. Позднее, по мере просветления среды, через 48-36 часов, на дне пробирки формируется слизистый осадок, поднимающийся при встряхива­нии в виде косички. Мукоидные штаммы растут с более интенсивным по­мутнением среды. На плотных средах через 24 часа культивирования фор­мируются круглые, выпуклые, с гладкой, влажной поверхностью, ровны­ми краями полупрозрачные колонии диаметром 1-3 мм. На кровяном ага­ре при росте P. multocida гемолиз отсутствует. Культуры
P. multocida cepoвара А образуют крупные (более 3 мм), слизистые колонии. В последующих пассажах может наблюдаться диссоциация и появление наряду с колония­ми S-формы шероховатых колоний R-формы.

P. haemolytica при росте на жидких питательных средах вызывает равномер­ное помутнение, обычно без формирования пристеночного кольца. На плотных средах через 24 часа культивирования формирует круглые, выпуклые, с ровны­ми краями полупрозрачные колонии. В результате культивирования на кровя­ном агаре с кровью крупного рогатого скота вокруг колоний образуется зона β-гемолиза, на агаре с кровью кролика, барана гемолитические свойства обнару­живаются только после снятия колонии с поверхности питательной среды.

Морфология клеток пастерелл в культуре. В мазках из культур клетки пастерелл обычно полиморфны, выглядят как мелкие грамотрицательные палочки, овоиды вплоть до кокков. Жгу­тиков не имеют. При окраске по методу Гинса у P. muttocida обнаружива­ется хорошо выраженная капсула.

Идентификация пастерелл на уровне рода. Классификация представителей недавно сформированного семейства Pasteurellaceae еще не завершена. Критерии дифференциации трех родов семейства довольно относительны, поэтому идентификацию целесообраз­но проводить сразу на уровне вида, хотя различать роды Actinobacillus, Pasteurella, Haemophilus, а также сходных представителей рода Yersinia (семейство Enterobacteriaceae) можно с учетом свойств, изложенных в таблице 70.

Таблица 70 - Дифференцирующие признаки родов семейства