Выделение и идентификация культур морганелл

Культивирование. Морганеллы являются факультативными анаэробами, обладающими и ды­хательными и бродильными типами метаболизма. Хемоорганотрофы. Раз­множаются при температурах от 12 до 43° С. Оптимальная температура роста 37° С, рН 7,0-7,4. К питательным средам неприхотливы и хорошо растут на всех простых средах.

Пробы фекалий или содержимое кишечника суспендируют в соотноше­нии 1:20-1:30 в стерильном физиологическом растворе. Приготовленные суспензии отстаивают 10-15 мин при комнатной температуре для осажде­ния крупных частиц и делают высевы надосадочной жидкости на среды Эндо, Плоскирева или висмут-сульфит агар. Из другого патологического материала делают высевы в МПБ, на МПА, агар Эндо, Плоскирева или висмут-сульфит агар. Посевы инкубируют 18-24 часа при 37-38° С. По истечении указанного срока посевы просматривают, на каждой из чашек отбирают по 1-2 колонии, характерных для морганелл, и отсевают их на скошенный МПА в пробирках. При наличии роста только в МПБ и обна­ружении в культуре грамотрицательных с закругленными концами пало­чек, не образующих спор и капсул, культуру пересевают на упомянутые выше селективно-дифференциальные среды, с которых в дальнейшем про­изводят отбор типичных колоний для дальнейшего изучения биологичес­ких свойств выделенных культур. В случае роста характерных для морга­нелл колоний в посевах из нескольких органов и тканей пересев делают с культур, полученных не менее чем из двух из них.

Характер роста морганелл на питательных средах. На плотных питательных средах (МПА, агаре Хоттингера) в течение 18-24 часов образуются округлые с ровными краями, выпуклые, с глад­кой блестящей поверхностью, серовато-белые колонии диаметром 1-3 мм. На агаре Плоскирева колонии росинчатые, полупрозрачные, голубовато-серого цвета, ко 2—3-м суткам культивирования они приобретают серова­то-белый цвет. На висмут-сульфит агаре колонии морганелл округлые, с ровным краем, гладкие, блестящие, более плоские, чем на МПА, имеют зеленовато-оливковый цвет. При многократных пересевах характерные S-формы колоний морганелл могут переходить в шероховатые R-формы из-за диссоциации культур.

В МПБ, бульоне Хоттингера, пептонной воде рост морганелл проявля­ется в виде равномерного помутнения среды с образованием легко разбива­ющегося при встряхивании осадка.

Морфология клеток морганелл в культуре. В мазках из культур морганеллы обнаруживают в виде грамотрицатель­ных, прямых палочек с закругленными концами. Диаметр клеток 0,6-0,9 мкм, длина 1,5-3,0 мкм. Подвижны за счет перетрихиально располо­женных жгутиков. Спор и капсул не образуют. В поле зрения располагают­ся одиночно, реже — попарно.

Идентификация морганелл по ферментативным признакам. Выделенные чистые культуры микроорганизмов с характерными для мор­ганелл культурными, морфологическими и тинкториальными свойствами относят к роду Мorganella и виду M.morganii на основании изучения их ферментативных свойств.

Морганеллы образуют индол, не образуют сероводород, проба с мети­ловым красным положительная, реакция Фогеса-Проскауэра отрицатель­ная, на агаре Симмонса с цитратом не растут, по лизиндекарбоксилазе и аргининдигидролазе отрицательные, дезаминируют фенилаланин и трип­тофан, декарбоксилируют орнитин, гидролизуют мочевину. Способны к росту в присутствии KCN. Из Сахаров и многоатомных спиртов катаболи-зируют с образованием кислоты и газа (иногда с задержкой его образова­ния) только D-глюкозу и D-маннозу.

Если на этапе идентификации установлено, что M.morganii выделены из селезенки, крови сердца, костного мозга, головного мозга (не менее чем из двух любых перечисленных материалов), то эти микроорганизмы отно­сят к патогенным, их этиологическую роль в заболевании считают уста­новленной без изучения серологических свойств и постановки биопробы. В других случаях проводят дальнейшие исследования с целью определения патогенных свойств морганелл.

К факторам патогенности морганелл относят эндотоксин, действие ко­торого не является специфичным и аналогично действию эндотоксинов дру­гих представителей энтеробактерий. Оно проявляется в отношении цент­ральной нервной системы и кишечника (преимущественно толстого его от­дела). Свойства образуемого морганеллами термолабильного экзотоксина изучены недостаточно. Большая часть патогенных штаммов морганелл продуцирует гемолизины, вызывающие лизис эритроцитов разных видов животных и человека. Проявлению патогенных свойств способствует и карбоксилазная ак­тивность этих бактерий.

Культуру выделенных морганелл относят к патогенной в случае уста­новления ее принадлежности к одной из серогрупп, наиболее часто вызыва­ющих заболевание у молодняка животных, или при положительном резуль­тате биопробы.