Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Способы определения общего белка§ Азотометрические (метод Кьельдаля) — полное разрушение белка серной кислотой → определение содержания аммиака. Недостатки — трудоемкость, низкая точность. § Основанные на определении плотности сыворотки крови (способом падающей капли) — неточны, т.к. плотность зависит от содержания не только белков, но и других веществ, находящихся в плазме. § Гравиметрические (весовые) — осаждение белков, высушивание, взвешивание. Недостатки — трудоемкость, низкая точность. § Нефелометрические, поляриметрические методы — из-за недостаточно высокой специфичности, чувствительности и других причин не получили широкого распространения в клинико-лабораторной практике. § Флуориметрические — включение в структуру белка или полипептида флуорогенной метки (флуоресцамин) → измерение интенсивности флуоресценции при возбуждении светом. Высокая чувствительность (до 1 мг/л). § Спектрофотометрические: Фотометрия в ультрафиолетовом диапазоне (λ =280нм). Поглощение обусловлено присутствием аминокислот тирозина, трипотофана, фенилаланина. Интерференция — нуклеиновые кислоты (адсорбируют на 280нм), рН (надо щелочную), мутность раствора. § Колориметрические: § Биуретовая реакция — в щелочной среде ионы меди образуют с белками (и пептидами) комплексы фиолетового цвета, измерение 500-560 нм. Хорошо воспроизводим, специфичен, доступен. Унифицирован. Чувствительность до 300 мг/л. Интерференция – высокая концентрация билирубина, триглицериды, избыток CO2. Большинство лекарств интерференцию не вызывают. § Биуретовый метод Лоури — биуретовая реакция + реакция Фолина (восстановление комплекса молибдат-вольфрамат-фосфорная кислота) тирозином и триптофаном белка. Чувствительность ↑ в 100 раз. Недостаток — невысокая специфичность. Интерференция — мочевая кислота, аминокислоты, ксантин, фенолы, углеводы, салицилаты, антибиотики, продукты ПОЛ, вещества, входящие в буферы). Применение — научные исследования. § Методы, основанные на неспецифическом связывании белков с красителями: амидо черный, бромкрезоловый зеленый, тимоловый синий, бромсульфалеин, Кумасси бриллиантовый синий и др.). Кумасси — не выявляет олигопептиды и свободные аминокислоты.
|