С помощью хромогенных субстратов

Синтетические субстраты применяются для определения гепарина, особенно при использова­нии низкомолекулярного гепарина (НМГ). Гепа­рин определяется опосредованно: используется его способность усиливать комплексообразование ф.Ха или тромбина с антитромбином и тем самым подавлять активность этих протеаз, после чего оп­ределяется их остаточная активность (рис. 110). Тест с определением остаточной активности ф.Ха («анти-Ха-активность») применяется при контро­ле за лечением короткоцепочечным фракциони­рованным гепарином, который обладает большей тропностью к ф.Ха, чем к тромбину. Кроме того, ф.Ха - относительно стабильный фермент, поэто­му тест с использованием этого фактора техни­чески более надежный, чем тест с активным тром­бином.

Тест может выполняться в разных модифи­кациях: как кинетический метод, определение по начальной скорости или метод по конечной точке. В некоторых тестах используется насы­щающая концентрация AT, тогда тест обозна­чается как «общий гепарин», в других - исполь-

зуется эндогенный AT пробы, в этих случаях тест обозначается как набор для определения комплекса гепарин-АТ, или «активный гепа­рин». Определение гепарина с использованием хромогенных субстратов легко адаптируется для автоматических биохимических анализато­ров. На результаты теста с хромогенными суб­стратами не оказывают влияния продукты дег­радации фибрина (ПДФ) и повышенное содер­жание ф.VIII, которые меняют результаты при определении АЧТВ.

Для тестов на определение гепарина разра­ботаны и промышленно выпускаются калибра­торы - лиофильно высушенные препараты плаз­мы со стандартным содержанием гепарина. Ка­либраторы должны быть тестированы по стан­дарту ВОЗ, которому придано значение актив­ности 1,0 анти-Ха-Ед/мл. Терапевтический диа­пазон для лечения гепарином рекомендуется в пределах 0,3-0,7 анти-Ха-Ед/мл.