Подсчет лейкоцитов

Для подсчета количества лейкоцитов кровь разводят в 20 раз при помощи реактива – жидкость Тюрка (3% уксусная кислота, подкрашенная метиленовым синим). Кислота разрушает оболочки клеток крови (эритроцитов и лейкоцитов), а метиленовый синий подкрашивает ядро лейкоцитов. Разведение можно делать в лейкоцитарных меланжерах (смесителях) или пробирках.

Для пробирочного способа разведения берут 0,4 мл жидкости Тюрка и добавляют 0,2 мл крови. Полученный раствор перемешивают, заправляют в камеру Горяева, помещают под микроскоп и подсчитывают лейкоциты в сетке Горяева.

Считают в 100 больших неразделенных квадратах. Количество лейкоцитов подсчитывают по формуле:

Х = А * 50

Получаем количество лейкоцитов в 1 мкл крови, например, 4500 (4,5 тыс. в 1 мкл) или 4,5*10⁹/л

Увеличение количества лейкоцитов называется лейкоцитоз. Лейкоцитоз бывает физиологический, медикаментозный и патологический.

Физиологический лейкоцитоз наблюдают при беременности, после приема пищи у моногастричных животных, а также после тяжелой физической нагрузки.

Медикаментозный лейкоцитоз возникает после парентерального введения животным белковых препаратов, вакцин, сывороток и др.

Патологический лейкоцитоз возникает всегда при воспалительных процессах, гнойно-некротических процессах, при инфекционных заболеваниях.

Уменьшение количества лейкоцитов называется лейкопения. Она встречается при истощении, лучевой болезни, при некоторых инфекционных и вирусных заболеваниях.

Изучение морфологии клеток крови

Морфологию клеток крови изучают в мазках крови под микроскопом. Для этого нужно приготовить мазок крови.

Используют чистое обезжиренное стекло.

При приготовлении мазка предметное стекло зажимается между большим и средним пальцами левой руки. В правой руке находится шлифованное покровное стекло. Для получения мазков хорошего качества необходимо брать небольшие капли крови.

Прислонив край покровного стекла к капле крови, которая находится на предметном стекле, дают возможность распределиться ей между двумя стеклами. Если стекла чистые и сухие, кровь, в силу капиллярности, распределяется почти моментально. Угол между покровным и предметным стеклом не должен превышать 45-50⁰. Покровное стекло фиксируется между пальцами правой руки так, чтобы кончик одного или обеих пальцев касался края предметного стекла. В этих случаях мазки получаются с ровными краями. Передвигая покровное стекло по предметному спокойно и не очень быстро, приготовляют мазок. Кровь при движении покровного стекла тянется за стеклом и не подвергается травмированию.

Погрешности при приготовлении мазка

Хорошо приготовленный мазок должен занимать 2/3 стекла и заканчиваться «метелкой».

После приготовления мазок должен высохнуть. Затем проводят его фиксацию с целью предотвращения разрушения клеток крови и закрепления их на стекле.

После фиксации проводят окраску мазков. Существует несколько способов окраски мазков крови:

Метод Романовского-Гимзе. Фиксированные этиловым спиртом (20 минут) или смесью Никифорова (этиловый спирт + этиловый эфир в соотношении 1:1) мазки заливают рабочим раствором красителя Романовского-Гимзе на 20-30 минут. Затем мазки промывают дистиллированной водой, высушивают и микроскопируют. Приготовление рабочего раствора: 2 капли заводского красителя на 1 мл дистиллированной воды.

Метод Май-Грюнвальда. Высушенный препарат фиксируют концентрированным раствором иозина Май-Грюнвальда 3 минуты, промывается дистиллированной водой. Затем мазки окрашиваются рабочим раствором в течение 10 минут, снова промываются дистиллированной водой, высушиваются и микроскопируются.

Есть несколько способов проведения микроскопии в зависимости от качества приготовления мазка.

Если мазок густой, то лучше микроскопировать в области «метелки» однопольным методом.

Равномерный мазок микроскопируют несколькими способами:

- ступенчатый (б)

- однопольный

- трехпольный (а)

- четырехпольный (в)

Мазок крови помещают под микроскоп, наносят каплю инверсионного масла и исследуют.

В первую очередь исследуют ЛЕЙКОЦИТЫ. В зависимости от характера и наличия зернистости в цитоплазме лейкоциты подразделяют на:

- гранулоциты, или зернистые: эозинофилы, базофилы, нейтрофилы; их цитоплазма содержит зернистость;

- агранулоциты, или незернистые: лимфоциты, моноциты; их цитоплазма не содержит зернистости.

При исследовании лейкоцитов выводят лейкограмму – это процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов, записанное в определенном порядке. Сумма клеток лейкограммы должна быть равна 100.

* - абсолютное количество каждого вида лейкоцитов

Б азофилы. Ядро неправильной формы, в цитоплазме содержится зернистость темно-фиолетового цвета. В норме 0,1-0,2, чаще всего в лейкограмме их нет.

Э озинофилы. Содержат в цитоплазме розовую или ярко-красную зернистость (гранулы).

Н ейтрофилы. Их зернистость в цитоплазме практически не видна. В зависимости от зрелости нейтрофилы подразделяются на:

- М иелоциты – незрелая форма нейтрофилов; встречается только при сильной патологии. Содержат округлое ядро.

- В процессе созревания происходит центральной вдавливание ядра à Ю ные нейтрофилы: имеет подковообразный вид, встречается только при патологии; незрелая форма нейтрофилов.

- П алочкоядерные нейтрофилы – в норме присутствуют в небольшом количестве (0-5). Относятся к незрелым формам нейтрофилов.

- С егментоядерные нейтрофилы – зрелая форма нейтрофилов. Ядро сегментировано, состоит из 2-5 сегментов, которые соединены тонкими перешейками. Если сегментоядерный нейтрофил «старый», то сегмента ядра отделяются друг от друга и ядро разрушается.

Л имфоциты – крупные клетки, практически целиком состоят из ядра, которое окрашено в темно фиолетовый цвет; цитоплазма светло-голубая, может быть незаметна. Зернистость цитоплазмы отсутствует.

У всех животных, кроме кошки, лимфоцитарный профиль крови; у кошки – нейтрофильный.

М оноциты – крупные клетки с ядром неправильной формы. Зернистости цитоплазмы нет.

Изменение лейкограммы происходит в трех направлениях:

1)Увеличение или уменьшение содержания отдельных видов лейкоцитов, т.е. видовые лейкоцитозы и видовые лейкопении.

2)Появление в лейкограмме молодых и незрелых форм нейтрофилов.

3)Возникновение патологических изменений в ядре и цитоплазме.

Видовые лейкоцитозы и видовые лейкопении

Увеличение базофилов называется базофилия.

Увеличение эозинофилов – эозинофилия.

Уменьшение эозинофилов – эозинопения.

Увеличение любого вида нейтрофилов называется нейтрофилия.

Уменьшение любого вида нейтрофилов называется нейтропения.

Увеличение лимфоцитов – лимфоцитоз.

Уменьшение лимфоцитов – лимфопения.

Увеличение моноцитов – моноцитоз.

Уменьшение моноцитов – моноцитопения.

Увеличение или уменьшение содержания какого-либо вида лейкоцитов может быть абсолютным и относительным.

Абсолютный видовой лейкоцитоз характеризуется увеличением абсолютного числа лейкоцитов данного вида при нормальном или повышенном общем количестве лейкоцитов в крови.

Относительный видовой лейкоцитоз сопровождается уменьшением общего количества лейкоцитов и преобладанием в крови лейкоцитов данного вида за счет уменьшения числа других форм клеток. При этом абсолютное число лейкоцитов преобладающего вида остается в пределах нормы.

Иногда помимо лейкограммы (считают в мазке крови) определяют общее число лейкоцитов и абсолютное содержание лейкоцитов каждого вида в 1 мкл крови (в камере Горяева).

При оценке лейкограммы используют термин «ядро лейкограммы». Ядром лейкограммы являются нейтрофилы.

При увеличении процента П алочкоядерных лейкоцитов, а также М иелоцитов и Ю ных, говорят о сдвиге ядра влево.

При увеличении процента С егментоядерных лейкоцитов говорят о сдвиге ядра вправо.

Индекс ядерного сдвига определяют по формуле: ИС = .

При нормальном количестве палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов индекс ядерного сдвига не превышает 0,06-0,08.

Ядерный сдвиг от 0,08 до 0,15 называется слабым левым сдвигом.

Ядерный сдвиг от 0,15 до 0,45 называется средним левым сдвигом.

Показатель ядерного сдвига ниже 0,05 указывает на сдвиг вправо.

Нейтрофилия – увеличение любого вида нейтрофилов.

Нейтрофилия со сдвигом ядра влево бывает нескольких разновидностей:

1. Нейтрофилия с простым регенеративным сдвигом характеризуется увеличением числа палочкоядерных нейтрофилов до 10-15%. Процент сегментоядерных клеток при этом в норме или слегла уменьшен. Общее число лейкоцитов увеличено незначительно. Эту разновидность нейтрофилии наблюдают при легко протекающих острых инфекциях, воспалительных и некротических процессах мягких тканей с доброкачественным течением (нагноившиеся раны, местные гнойные отеки).

2. Нейтрофилия с резким регенеративным сдвигом сопровождается появление в крови юных нейтрофилов и иногда миелоцитов, повышением процента палочкоядерных и понижением сегментоядерных нейтрофилов. Общее число лейкоцитов увеличено. Встречается при острых инфекциях, перитоните, воспалительных заболеваниях внутренних органов.

3. Нейтрофилия с дегенеративным сдвигом характеризуется увеличение процента палочкоядерных клеток, появлением дегенеративных форм нейтрофилов, уменьшением сегментоядерных. Общее число лейкоцитов при этом остается в норме или слегка понижено. Такое состояние развивается при длительном воздействии на кроветворные органы бактериальных ядов, химических веществ, при тяжелых гнилостных инвазиях, истощении.

Нейтрофилия со сдвигом ядра вправо характеризуется увеличением процента сегментоядерных нейтрофилов при нормальном или незначительно сниженном проценте палочкоядерных. Она может быть трех вариантов:

1. Незначительное повышение процента сегментоядерных на фоне небольшого лейкоцитоза – наблюдается после кровопотерь, при легком течении инфекционных заболеваний.

2. Увеличение процента сегментоядерных при нормальном или пониженном количестве лейкоцитов – у старых и истощенных животных.

3. Значительное возрастание сегментоядерных при понижении или отсутствии палочкоядерных и выраженной лейкопении – отмечают при хронических септических процессах, онкологии, тяжело протекающих инвазионных заболеваниях.

Нейтропения – понижение общего количества нейтрофилов. Нейтропения наблюдается при инфекционных и вирусных болезнях, протекающих с лимфоцитозом. Нейтропения на фоне гнойно-воспалительного процесса свидетельствует о снижении сопротивляемости организма и неблагоприятном течении заболевания.

Лимфоцитоз – увеличение количества лимфоцитов. Встречается преимущественно при вирусных и бактериальных заболеваниях, при болезнях крови и как относительный лимфоцитоз при нейтропении.

Лимфоцитопения – снижение процента лимфоцитов. Часто лимфоцитопения сопровождает нейтрофилию. Наиболее сильная лимфоцитопения регистрируется при иммунодефицитах.

Эозинофилия – увеличение процента эозинофилов. Чаще встречается при гельминтозах, при эктопаразитах, аллергических заболеваниях. Эозинофилию также наблюдают при переходе остро протекающих болезней в хронические.

Моноцитоз – увеличение процента моноцитов. Часто наблюдается на стадии выздоровления, при инфекционных и гнойно-воспалительных заболевнаиях, что указыает на хорошую сопротивляемость организма.

Базофилия – увеличение процента базофилов. Отмечают при гельминтозах, аллергических состояниях, хронических болезнях ЖКТ.

Исследование ЭРИТРОЦИТОВ

Эритроциты здоровых животных имеют следующие морфологические признаки: отсутствие ядра, окрашивание в красноватый или красновато-оранжевый цвет, форма двояковогнутого диска.

Основные отличия эритроцитов разных видов животных – различные размеры эритроцитов и интенсивность центральной зоны просветления.

Также морфологическим признаком, который может присутствовать у здоровых животных, является слипание эритроцитов в виде монетного столбика. Наиболее выражен монетный столбик в крови у лошадей и кошек. У КРС таких образований не наблюдается.

Патологические изменения эритроцитов чаще наблюдаются при анемиях и характеризуются:

1. Изменением размера – анизоцитоз, когда появляются эритроциты больше обычного (макрофитоз) и меньше обычного (микроцитоз);

2. Изменением формы – пойкилоцитоз – появление эритроцитов овальной, звездчатой или любой другой неправильной формы;

3. Изменением окраски – анизохромия – могут появляться гипохромные и гиперхромные эритроциты.

В эритроцитах могут быть обнаружены разные включения.